chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响药学论文
chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响_药学论文 作者：朱克修，李玢，王佳，韩晓兵 【摘要】 目的：观察卵巢癌SKOV3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变
chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响_药学论文 作者：朱克修，李玢，王佳，韩晓兵 【摘要】 目的：观察卵巢癌SKOV3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作 用下细胞凋亡的变化. 方法：用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞的抑 制率，Western Blot法检测SKOV3细胞中Chk2蛋白的表达. 流式细胞仪及 TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV3细胞凋亡情况. 结 果：顺铂对SKOV3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高. Western Blot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV3细胞中Chk2蛋白表达受到 明显抑制. 流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV3细胞凋亡率为 （77.6±1.7）%，明显高于正常组（24.7±1.76）%，空脂质体组 （35.6±1.4）%及转染正义寡核苷酸细胞组（47.6±1.2）%. TUNEL法检测结 果与流式细胞法一致. 结论：chk2可作为卵巢癌增敏 治疗 的有效靶点. 【关键词】 chk2基因；反义核酸技术；卵巢肿瘤；顺铂 0引言 肿瘤细胞的多耐药性已成为恶性肿瘤化疗失败的重要原因［1］，进行化疗增敏 或寻找新的治疗手段具有重要意义. 细胞周期检测点是增强肿瘤治疗敏感性研 究的热点之一［2］. 肿瘤的耐药与肿瘤细胞逃避放化疗诱导的肿瘤细胞凋亡有 关，因为放化疗作用下可使细胞周期检测点激活，导致细胞周期停滞和细胞的 损伤修复，从而使肿瘤细胞避免凋亡. 周期检测点激酶1，2 （check point kinase 1，2，Chk1，Chk2）是细胞周期检测点中最关键的效应蛋白酶［3］. 国外一些研究表明，转染chk1/chk2反义寡核苷酸可明显提高一些肿瘤模型对 抗肿瘤药物的敏感性，说明chk1/chk2可能是一些肿瘤增敏治疗的有效靶点 ［4］. 本研究通过检测chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡的 影响，以探讨chk2能否作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点. 1材料和方法 1.1材料SKOV3细胞株由西安 交通 大学临床医学研究分子中心提供. RPMI 1640购自Gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，噻唑 蓝（MTT）购自Amressco公司，转染试剂Lipofectamine 2000购自 Invitrogen公司，鼠抗人Chk2 mAb购自NEOMARKERS公司，辣根酶标记羊抗鼠 二抗购自博士德公司，原位细胞凋亡检测试剂盒购自华美生物工程公司. 1.2方法 1.2.1细胞培养人卵巢癌细胞SKOV3常规培养在含100 mL/L胎牛血清的 RPMI1640培养基中，培养条件为37℃，50 mL/L CO2饱和湿度，待细胞长满 瓶底时，2.5 g/L胰蛋白酶消化传代.
