实验四--乳鼠肺细胞原代培养

实验四 乳鼠肺细胞原代培养一、实验目的1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。2.学习细胞消化、细胞计数方法。二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第

实验四乳鼠肺细胞原代培养 一、实验目的 1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。 2.学习细胞消化、细胞计数方法。 二、实验原理 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后， 直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需 的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不 断的地生长及繁殖。 三、实验用品 1.设备 CO培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、恒温水浴箱、离心机等。 2 2.器材 眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、培养皿、纱布块（或不锈钢 网）、玻璃漏斗、量筒、移液管、试管、锥形瓶、吸管、橡皮头、培养皿等。 上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，15磅灭菌30min。此外，还需显微 镜、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球等。 3.试剂 （1）D-Hanks平衡盐溶液： 即无钙、镁离子的Hanks液。 （2）细胞消化液： 0.25％胰蛋白酶液（0.25g胰蛋白干粉，加D-Hanks平衡 盐溶液100mL，溶解后过滤除菌，调pH值7.4） （3）7.4％NaHCO溶液。 3 （4）RPMI1640培养液。 以上溶液均经适当包装，除菌后备用。此外，还需胎牛血清和1000U/mL的青、 链霉素液（双抗）。在RPMI1640培养液中加入10%胎牛血清，1%双抗，即成细胞 培养液。 4.仪器药品 以3-5人为一个小组，每组需备：乳鼠一只；眼科剪、眼科镊各两把；90mm 玻璃培养皿3个，用以清洗组织块；50mL离心管1个；5mL、10mL移液管各5支； 35mm培养皿1个。 四、材料 出生后2-3天的乳鼠。 五、实验步骤 1.清洗与消毒 操作者首先进行手的清洗与消毒。 2.处死动物 新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟，置平皿中。 3.取肺 左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分 撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋 骨，然后在切口中间横剪胸骨。用眼科聂取出肺，置于盛有Hanks液（含有 200U/ml青链霉素）的玻璃平皿中，冲洗去血。 4.剪肺 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科