毕赤酵母产木聚糖酶实验方案

重组毕赤酵母产木聚糖酶摇瓶培养实验 毕赤酵母简介 甲醇营养型毕赤酵母(Pichia pastoris) 表达系统是80年代初被开发和研制的一种新型酵母表达系统。40年前,Ogata等人首次发现有些酵母

重组毕赤酵母产木聚糖酶摇瓶培养实验 毕赤酵母简介 甲醇营养型毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是80年代初被开发和研制 的一种新型酵母表达系统。40年前,Ogata等人首次发现有些酵母能够利用甲醇作 为唯一的碳源和能源进行生长。随后,甲醇营养酵母作为潜在的单细胞蛋白(single cellprotein,SCP)来源立即引起广泛关注,最初将其作为高蛋白的动物饲料在市 场上销售。在20世纪70年代,PhillipsPetroleum公司开发出毕赤酵母利用甲醇 生长的培养基、发酵操作手册和高密度连续培养生产工艺。70年代的石油危机导 致了甲烷价格的急剧上升,与此同时,动物饲料蛋白的主要替代源——大豆价格的下 降,导致利用甲醇生产SCP在经济上已不再合适。在以后的10年中,PhiLLips PetroLeum公司与SIBIA公司合作开发利用毕赤酵母作为生物体表达外源蛋白的研 究,研究人员分离了醇氧化酶(alcoholoxidase,AOX)的基因和启动子,构建了表 达载体和菌株,开发了毕赤酵母基因操作相关技术。成熟的SCP发酵方法的开发,加 上醇氧化酶强启动子的可调控表达特性,极大地影响着外源蛋白在毕赤酵母中的高 水平表达。1993年,PhillipsPetroleum公司委托Invitrogen公司代理毕赤酵母 表达系统产品。 毕赤酵母能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长,其中醇氧化酶AOX ——甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30%。而在葡萄糖、甘油或乙醇 作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX。AOX的合成是在转录水平调控的。其基因 启动子具有明显的调控功能,可用于调控外源基因的表达。此调控作用是由一般碳 源抑制/解抑制及碳源特殊诱导机制控制的。外源基因在甲醇以外的碳源中处于非 表达状态,而在培养液中加入甲醇后,外源基因即被诱导表达。巴斯德毕赤酵母中存 在着一种称为微体的细胞器,其中大量合成过氧化物酶,因此也称为过氧化物酶体。