九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验

九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验In Vitro Mammalian Cells Chromosome Aberration Test1 范围 本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基

九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 In Vitro Mammalian Cells Chromosome Aberration Test 1 范围 本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.473, July 1997) 3 试验目的 本试验是用于检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。 4 定义 (Chromosome-type aberration) 染色体型畸变：染色体结构损伤，表现为在两个染色单体相 同位点均出现断裂或断裂重组的改变。 (Chromatid-type aberration) 染色单体型畸变：染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染 色单体断裂重组的损伤。 (Numerical aberration) 染色体数目改变：所用细胞株的正常染色体数目的变化。 (Structural aberration) 结构畸变：在细胞分裂的中期相阶段，用显微镜检出的染色体结构 改变，表现为缺失、断片、互换等。 (Mitotic index) 有丝分裂指数：中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是一项反映细 胞增殖程度的指标。 5 试验基本原则 在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中 期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞， 制片，染色，分析染色体畸变。 6 试验方法 6.1 试剂和受试物制备 6.1.1 阳性对照物：可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物，阳性对照物应是已 知的断裂剂，能引起可检出的、并可重复的阳性结果。当外源性活化系统不存在时，可使用 methyl methanesulphonate (MMS)ethyl methanesulphonate(EMS) 甲磺酸甲酯（）、甲磺酸乙酯（）、 (ethyl nitrosourea)C(mitomycin C)4--N- 乙基亚硝基脲、丝裂霉素、硝基喹啉氧化物 4-nitroquinoline-N-oxidea[benzo(a)pyrene] （）。当外源性活化系统存在时，可使用苯并（）芘、 (cyclophosphamide) 环磷酰胺。 6.1.2 阴性对照物：应设阴性对照，即仅含和受试物组相同的溶剂，不含受试物，其它处理 和受试物组完全相同。此外，如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空 白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照。 6.1.3 受试物 6.1.3.1 受试物的配制：固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中，用前稀释至适合浓度；液体受试 114