(完整word版)Sephadex-LH-20使用说明

技术文章Sephadex LH-20使用说明Sephadex LH-20使用说明1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，SephadexG-25羟丙化后就是SephadexLH-20。

技术文章 Sephadex LH-20使用说明 Sephadex LH-20 使用说明 1Sephadex GSephadexG-25 型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，羟丙化后就是 SephadexLH-20 。其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层 析效果。虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。此外上柱样品 损失很少，对处理小样品较好，这也是实验室常用的原因之一。 2Sephadex LH20 的原理。 SephadexLH20 的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用 （在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来， SephadexLH20 小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，对化合物 还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保 留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 3Sephadex LH20 洗脱溶剂。 SephadexLH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱， 100 以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用％甲醇冲柱。正 50 相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后 100 用％甲醇冲柱。 4Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。 如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－水），样品用最少体积的甲醇－水（尽 Sephadex LH20 可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤！要是把堵啦， SephadexLH20 就得将的柱头部分弃去）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯 仿－甲醇），样品用最少体积的氯仿－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 5Sephadex LH-20 的步骤。 (1) 选择条件： Sephadex 梯度洗脱在使用中并不象在正相柱层析中那么重要。首先你的样品须要能溶 ; 解在尽量少量的洗脱剂中。极性在的用甲醇水系统极性小者一般用不含水的系统。我 们实验室常用正己烷二氯甲烷甲醇系统，用了很多年，效果较好。 (2) 饱和层析柱： 用洗脱剂将凝胶摇匀，直立柱身，让其自然沉降，此时要防止气泡留在其中。至少半小 时打开开关，流出几个柱体种的洗脱剂，目的是使其膨胀在正确比例的洗脱剂中。 (3) 样品处理：用尽量少的洗脱剂溶解样品，常压过滤。 (4) 湿法上柱。这也是要有技巧的步骤。 (5)1drop/s; 洗脱：控制流速，一般以下，可参见厂家的一些参数必要时更改极性（很 多时一个极性就可以将样品洗脱完毕）。再生以备下次使用。 6 分离的技巧 1 （）流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。