尘螨促进DCs-TIM4的表达以及诱导Th2细胞分化的研究

尘螨促进DCs TIM4的表达以及诱导Th2细胞分化的研究目的：体外研究尘螨(House dust mite,HDM)是否通过诱导小鼠骨髓来源成熟树突状细胞(mature Dendritic cell

尘螨促进DCsTIM4的表达以及诱导Th2细胞分化的研究 目的：体外研究尘螨(Housedustmite,HDM)是否通过诱导小鼠骨髓来源成 熟树突状细胞(matureDendriticcells,mDCs)T细胞免疫球蛋白域和粘液素样 域-4(TIM4)的表达,进而促进初始T细胞分化为Th2细胞。方法：1.分离、培养 小鼠骨髓来源的mDCs,显微镜下观察其生长、变化,流式细胞仪测定细胞表面分 子CD11C、CD80、MHC-II、CD86对细胞进行鉴定；2.培养的mDCs分为四组：空 白对照组(0U/mlHDM)\100U/mlHDM刺激组、200U/mlHDM刺激组、400U/mlHDM 刺激组,DCs与不同浓度HDM共同培养48h,收集HDM刺激后的DCs,分别用流式 细胞仪、WesternBlotting检测各组中TIM4的表达；3.将空白对照组、 400U/mlHDM刺激组的DCs与小鼠初始T淋巴细胞共同培养48h,ELISA法测定 混合培养细胞上清液中细胞因子IL-4及IFN-γ的表达,说明HDM对Th2细胞分 化的影响。 结果：1.收集培养第10天的DCs,流式细胞仪测定CD11C、CD80、MHC-II、 CD86分子表达率分别为(95.18±1.20)%、(85.07±2.05)%、(90.85±1.24)%、 (70.78±1.57)%。提示所培养的细胞为mDCs；2.不同浓度HDM刺激DCs48h后, 分别用流式细胞仪和WesternBlotting测定TIM4的表达。 流式细胞仪测定不同组TIM4+细胞百分比分别为：(5.01±3.02)%、 (12.78±1.57)%、(24.17±2.45)%、(55.85±2.24)%,与空白对照组相比,HDM刺 激组TIM4表达水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western Blotting结果同样说明两组间差异具有统计学意义(P<0.05)；3.ELISA法检 测经不同浓度HDM刺激后DCs与初始T细胞混合培养上清液中IL-4及IFN-γ 的表达水平,空白对照组、4OOU/mlHDM组IL-4水平分别为(2.52±2.80)pg/ml、