药学毕业论文--啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表达载体的构建

药学毕业论文--啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表达载体的构建啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表达载体的构建 作者:冯丽玲,卢文婕,曾庆平 【摘要】 【目的】 克隆啤酒酵母鲨烯合酶基因及构建其基因

药学毕业论文--啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表 达载体的构建 啤酒酵母鲨烯合酶基因的克隆及其基因表达载体的 构建 作者:冯丽玲,卢文婕,曾庆平 【摘要】【目的】克隆啤酒酵母鲨烯合酶基因及构建其基因表达载体,为在 微生物体内重建青蒿素合成途径打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩 增、扩增片段与T载体连接和克隆片段的序列分析;酶切并回收目的基因,反向插 入酵母表达载体pGAPZαA,双酶切鉴定重组子。【结果】通过PCR扩增获得1335 bp片段,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定。初步测序结果与GenBank上已登录 的酵母鲨烯合酶基因序列基本吻合,相差仅数个碱基对;将此片段反向插入酵母表达 载体pGAPZαA,构建了反义酵母表达载体,并通过双酶切加以鉴定。【结论】成功 克隆了啤酒酵母鲨烯合酶基因并进行了测序,同时构建了反义酵母表达载体。 【关键词】啤酒酵母;鲨烯合酶基因;基因复制;反义酵母表达载体 青蒿素是我国自主研収的抗疟原虫中药有效单体,对多药抗性疟原虫有效,现已 成为全球抗疟药的希望。若将青蒿素生物合成途径从青蒿“搬到”酵母中,就能在 収酵罐内实现青蒿素的工业化生产。为了探索在酵母内导入鲨烯合酶基因反义序列 抑制鲨烯合酶基因表达而1 使青蒿素合成增加的可能性,本研究克隆了酵母鲨烯合酶基因,并经测序予以证 实,同时构建反义酵母表达载体,为下一步培育青蒿素生产酵母菌打下了基础。现报 道如下。 1材料与方法