核酸电泳常见问题及解决方案

问题可能原因处理方法DNA Marker降解核酸酶污染每次吸收时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带入管中；用后密闭4°C保留保留不妥4°C 或-20°C保留，避免数次反复冻融；不可加热DNA Marker

问题 可能原因 处理方法 DNAMarker降解 核酸酶污染 每次吸收时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液 带入管中；用后密闭4°C保留 保留不妥 4°C或-20°C保留，避免数次反复冻融； 不可加热 DNAMarker无法 琼脂糖质量差 使用质量可靠琼脂糖制胶 正确分离 电泳缓冲液数次使用后失效 更换缓冲液 条带黯淡 核酸浓度过低 增加上样量 核酸降解 使用不含核酸酶试剂和耗材制备样品 DNA条带被示踪染料掩盖 提升上样量；避免使用和目标片段迁移率相 同示踪染料 条带模糊或弥散 电泳缓冲液数次使用后失效 更换缓冲液 核酸部分降解 使用不含核酸酶试剂和耗材制备样品 核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋 酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂 白或高浓度盐份 质 电压过低，电泳时间过长 依据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用合适 电压进行电泳 染色时间过长或拍照前放置过久， 电泳结束后立即观察、拍照 DNA条带弥散 条带缺失 DNA条带分子量过大 使用脉冲凝胶电泳 分子量靠近DNA条带没有分开 选择合适凝胶浓度进行电泳 电泳缓冲液使用不妥 SD和TBE缓冲液适于分析较小分子量DNA 片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲 液不适于分离很小DNA片段 电泳时间过长或电压过高，DNA走 缩短电泳时间，调整电压 出凝胶 电极插反，DNA走出凝胶 正确连接电极方向 条带大小不正确 核酸降解或形成聚合物 加热处理或重新制备样品 λDNA酶切Markercos位点复性 电泳前65°C加热5分钟，冰上冷却5分钟 以后再上样 相同分子量DNA片段因为结构或序 判定DNA分子是否有特殊结构，如缺口、超 列差异而有不一样迁移率 螺旋、二聚体等；富含AT碱基DNA迁移率 比同分子量富含GC碱基DNA片段慢 梳子变形，点样孔不在同一水平线 使用完好梳子制胶