大鼠透明质酸合成酶3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究_30319

大鼠透明质酸合成酶3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究_303193基因真核表达载体的构建及趋化作用研究 [标签:来源] 【摘要】 目的: 3(hyaluronan synthase3)真核表达载

大鼠透明质酸合成酶3基因真核表达载体的构建及趋化作 用研究_30319 3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究 [标签:来源] 【摘要】 目的: 3(hyaluronan synthase3)真核表达载体, 转染真核细胞并检 测重组蛋白酶活性。方法: 提取损伤大鼠坐骨神经总RNA, RTPCR扩增HAS3编码框 cDNA, 构建于真核表达载体pcDNA3.1D中, 并亚克隆到荧光载体pEGFPN1中。将构 建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96, 检测HAS3的表达及酶活性。研究转染细胞 培养上清对巨噬细胞的趋化作用。结果: HAS3真核表达载体pcDNA3.1DHAS3及 pEGFPHAS3测序结果显示片段插入正确, 序列与GenBank公布数据一致, 转染 RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性, 过表达HAS3细胞的培养上清对巨 噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清。结论: 成功地构建HAS3真核表达载 体且真核表达的重组HAS3具有合成HA活性, HAS3过表达培养上清能趋化巨噬细 胞, 在体内可能参与到炎症反应中。 【关键词】 透明质酸合成酶 载体构建 真核表达 趋化 透明质酸(hyaluronic acid, HA)是由葡萄糖醛酸及乙酰氨基葡萄糖二糖单位 重复排列构成的不典型的氨基聚糖, 广泛的分布于各种结缔组织、 皮肤、 软骨、