SODPODCATMDA和可溶性蛋白的测定

植物组织中SOD、POD、CAT、MDA和可溶性蛋白的测定磷酸缓冲液的配制：A液：0.2M的KH2PO4溶液 称取分析纯KH2PO427.216克，用蒸馏水定容至1000毫升。B液：0.2M的K2H

SODPODCATMDA 植物组织中、、、和可溶性蛋白的测定 一、 磷酸缓冲液的配制： A液：0.2M的KHPO溶液称取分析纯KHPO27.216克，用蒸馏水定容至1000毫升。 2424 B液：0.2M的KHPO溶液称取分析纯KHPO•3HO45.644克，用蒸馏水定容至1000毫升。 24242 或 （A液：0.2M的NaHPO溶液称取分析纯NaHPO•2HO31.21克，用蒸馏水定容至1000毫 24242 升。B液：0.2M的NaHPO溶液称取分析纯NaHPO•12HO71.64克，用蒸馏水定容至1000 24242 毫升。） 二、酶液的制备： 0.5g5PH=7.8 称取放入研钵中，加毫升的磷酸缓冲液，冰浴研磨，匀浆 204000/ 倒入离心管中，冷冻离心分钟（若做可溶性蛋白，转速为转分钟，若不做，则 0 10000/0~4C 转分钟），上清液（酶液）倒入试管中，置于下保存待用。 三、 SOD 的测定： 1.SOD 反应液的配制： 母液的配制： （1）0. 21.25228.251000 05MPH=7.8Aml+Bmlml; 磷酸缓冲液（）：液液定容至 100 (2)130mMMet()1.9399Metml 甲硫氨酸：取克用磷酸缓冲液定容至； 100 3750MNBT0.06133gNBTml （）μ四氮唑蓝（）：取用磷酸缓冲液定容至； 1000 (4)100MEDTA-Na:0.0372gEDTA-Naml μ取用磷酸缓冲液定容至，避光保 22 存； 1000 (5)20MFD():0.00753gFDml μ核黄素用磷酸缓冲液定容至。 SODMetNBTEDTA-NaFDHO15 反应液：磷酸缓冲液：：：：核黄素（）：的比例为： 22 33332.5 ：：：：，按母液顺序配制。 2.SOD 的测定 2034000Lux ：取型号相同的试管，吸取微升的酶液，加入毫升，照光 30 分钟，同时取四支试管，三支做对照，一支做空白（不加酶液，以缓冲液代替）； CK4000Lux30 空白置暗处，对照（）与酶液同置于条件下照光分钟，遮光保存， 560nm 以空白调零，比色。 3. 结果计算 SOD/gFW=A—A×VW×0.5×A 总活性（吸光度·）（）／（） CKECK NBT50% 单位：光还原为单位 SOD/mg=SOD/ 比活性（酶单位蛋白）总活性蛋白质浓度 POD 四、的测定： 1. 0.1MPH6.0 磷酸缓冲液的配制： A219.25+B30.751000 液液，定容至毫升； 2. POD 反应液的配制 0.1MPH6.05028 ：的磷酸缓冲液毫升于烧杯中，加入愈创木酚微 30%HO19 升，磁力搅拌器加热搅拌使之完全溶解，冷却后加入微升混合，保存于冰 22 箱中。 3. POD 的测定 20+3470nm1 ：微升酶液毫升反应液于比色皿中，在下每隔分钟读数一次， A470/minmgprA470/mgFW 共读三次，以每分钟吸光度变化值（Δ·或Δ）表示酶活 力的大小。 4. 结果计算 PODA470/min=A470×V/Va/W=A470×5/0.02/0.5 ：活性（Δ·gFW）ΔΔ =A470×500 Δ CAT 五、的测定： 1. CAT 反应液的配制： 0.1MHO0.56830%HO100 溶液：毫升定容至毫升。 2222