微生物鉴定中的生理生化试验

微生物鉴定中的生理生化试验一．实验目的证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。了解糖发酵的原理，掌握通过糖发

微生物鉴定中的生理生化试验 一．实验目的 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不 同的酶系统。 2. 掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3. 了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 4. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二．实验原理 由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物 但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠 杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下： 1. 大分子水解试验 微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大 分子物质分解后，才能被微生物利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较 小化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪 酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌 落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定 时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH 降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪 酶。 2.糖发酵试验 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要，绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能 分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、加完、二氧化碳等）， 有些细菌只产酸不产气。例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡 萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发 酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸 时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉 氏小管中有无气泡来证明。 3．IMViC试验 IMViC是吲哚（indol）、甲基红（methylredtest）、伏-普（Voges-Prokauertest）和 柠檬酸盐（citratetest）四个实验的缩写，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多 用于水细菌学检查。硫化氢试验也是检查肠道杆菌的生化试验。大肠杆菌虽非致病菌，但在 饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查 水时要将两者分开。 吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲