HPLC原理

HPLC原理及方法简介 TOC \o "1-3" \h \z \u I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(s

HPLC 原理及方法简介 I ．概论 一、液相色谱理论发展简况 mobilephase 色谱法的分离原理是：溶于流动相()中的各组分经过固定相时，由于与固定相 stationaryphase ()发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中 滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 Tswett1906 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（）在年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的， Chromatography 色谱法()因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液 相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相 HighperformanceLiquid 色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法( ChromatographyHPLC60 ，)是在经典液相色谱法的基础上，于年代后期引入了气相色谱理论而迅速 发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力， HighPressureLiquidChromatographyHPLC 需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(，)。又 HighSpeedLiquidChromatographyHSLP 因分析速度快而称为高速液相色谱法(，)。 HPLC 二、的特点和优点 HPLC 有以下特点： 22 ——150-300Kg/cm75Kg/cm 高压压力可达。色谱柱每米降压为以上。 ——0.1-10.0mL/min 高速流速为。 ——5000100 高效可达塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达种。 ——0.01ng 高灵敏度紫外检测器灵敏度可达。同时消耗样品少。 HPLC 与经典液相色谱相比有以下优点： ——15-30min5min 速度快通常分析一个样品在，有些样品甚至在内即可完成。 —— 分辨率高可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 ——0.01ng0.1pg 灵敏度高紫外检测器可达，荧光和电化学检测器可达。 —— 柱子可反复使用用一根色谱柱可分离不同的化合物。 —— 样品量少，容易回收样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 三、色谱法分类 GCLC 按两相的物理状态可分为：气相色谱法()和液相色谱法()。气相色谱法适用于分离挥发性 GCGSCGLCGLC 化合物。根据固定相不同又可分为气固色谱法()和气液色谱法()，其中以应用最广。 LCLSC 液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。同样可分为液固色谱法()