实验三 双水相萃取糖化酶1

生物工程专业实验之三 双水相萃取糖化酶实验目的1. 通过实验使学生了解双水相萃取在生物活性物质提取中的重要作用；2. 加深对分配系数K、相比R、收率Y等基本概念的认识及相图的制作；3. 掌握液液萃

生物工程专业实验之三双水相萃取糖化酶 实验目的 1. 通过实验使学生了解双水相萃取在生物活性物质提取中的重要作用； 2.KRY 加深对分配系数、相比、收率等基本概念的认识及相图的制作； 3. 掌握液液萃取中基本实验技术； 实验原理 双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或 聚合物与盐之间的不相溶性，使得聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不相溶的两 相，因使用的溶剂是水，因此称为双水相。 原则上，无论是天然的还是合成的亲水聚合物， 绝大多数在与另一种聚合物水溶液混合时，都可分成两相，构成双水相体系，几种典型的双 水相系统见表一。通过溶质在相间分配系数的差异而进行萃取的方法称为双水相萃取。 表一几种典型的双水相系统 Dex 聚乙二醇，聚乙烯醇，葡聚糖（），羟丙基葡聚糖 聚丙二醇 Dex 聚乙烯醇，葡聚糖（），聚乙烯吡咯烷酮 聚乙二醇 硫酸葡聚糖钠盐 聚丙烯乙二醇 羧甲基葡聚糖钠盐 甲基纤维素 羧甲基葡聚糖钠盐 羧甲基纤维素钠盐 聚乙二醇 磷酸钾，硫酸铵，硫酸钠，硫酸镁，酒石酸钾钠 双水相萃取技术是分离纯化蛋白质混合物等生物大分子的有效方法。双水相系统通常是 由水溶性的两种聚合物组成或一种水溶性聚合物与一种盐组成，其中水占有较大的比例 70-95% （），相对于传统溶剂萃取来说，双水相萃取的最大优势在于双水相体系可为生物 活性物质提供一个温和的活性环境，因而可在萃取过程中保持生物物质的活性和构象，而且 双水相技术具有处理量大、能耗低、易连续化操作和工程放大等优点；在蛋白质、酶、核酸 等生物大分子的分离纯化等方面受到广泛重视，是一种有发展潜力的易于工业化应用的生物 分离技术。 K=C/C 生物大分子在双水相上相和下相的浓度比被定义为分配系数（）。在双水相系 tb 系统组成、聚合物分子量、聚合物浓 统中有许多因素影响分配系数，包括系统本身的因素如 pH 度、盐和离子强度、等 ，以及目标产物的性质如疏水作用、电荷、分子量等，利用双水 相技术，通过大量实验研究，可以获得特定蛋白质和生物大分子的最适宜分离的相系统和最 (PEG)/(Dex) 优分配的。在生化分离中得到广泛应用的双水相体系有：聚乙二醇葡聚糖体系， PEG/ 盐等体系。 分离某一生物大分子，两相系统的选择原则，必须有利于目的产物的萃取和分离，同时 又要兼顾到聚合物的物理性质。如甲基纤维素和聚乙烯醇，引起年度太高而限制了它们的应 PEGDex 用。和因其无毒性和良好的可调性而得到广泛的应用。