细胞冻存、复苏、传代、转染

细 胞 培 养 系 列 方 法【实验前准备】（ 1）实验前准备好高压的离心管、冻存管、 1ml/100ul 枪头、 PBS溶液。2）洁净超净工作台面，照紫外 30 分钟；同时依据需要将培育基、胎牛血

细胞培养系列方法 【实验前准备】 1ml/100ulPBS 枪头、溶液。 1 （）实验前准备好高压的离心管、冻存管、 ● 230 ）洁净超净工作台面，照紫外分钟；同时依据需要将培育基、胎牛血清、 PBS 胰酶液、双抗置于室温下复温。 细胞的冻存与复苏 【实验用品】 ● 170%-80% ）资料：培育的贴壁细胞（交融）、于液氮中冻存的细胞 ● 2PBS0.25%DMEM ）试剂：液、胰蛋白酶液、培育基、胎牛血清、二甲亚砜（ DMSO ）、双抗 ● 315ml1.5ml ）设施：培育瓶、巴氏吸管、离心管、冻存管、盛酒精的喷壶、 CO 酒精灯、水浴锅、培育箱、离心计、液氮灌、倒置显微镜、超净工 2 作台。 90%DMEM10%1% 培育液加的胎牛血清加的双抗。 1 试剂配制：（）完整培育基含 ● 280%DMEM10%10%DMSO ）冻存液含的培育基加的胎牛血清加的， 4 用吸管混匀，置于℃冰箱中备用。 细胞的冻存 (1) 0.25% 依据传代的方法用胰蛋白酶液对处于对数生长久的单层细胞进行消 化。 (2) 800-1000r/min5min 采集消化细胞于离心管中，离心。 (3) 弃上清液，加入适当冻存液，用吸管吹打细胞制悬，调整细胞密度为 67 5*10-1*10/ml 个。 (4) 1.5ml 每个冻存管分装细胞悬液，旋紧冻存管的盖，并用封口膜密封。 (5) 在冻存管上注明细胞的名称、冻存时间、冻存人名等。 (6) 4,0.5h-201h-80 将冻存管置于以下条件下逐渐加以冻存：℃→℃，→℃，过 夜→转入液氮灌中。 细胞的复苏 38 ℃。翻开离心计。 1 （）准备水浴锅，调温度至