《使用中常见问题》word版

Q-1：TA克隆的原理?大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都会在PCR产物的3′末端添加一个“A”，T载体是3′带有一个“T”的载体，在连接酶作用下，完成连接，其连接液可以直接用于细菌转化，大大

T 栽使用说明 Q-1：TA克隆的原理? 大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都会在PCR产物的3′末端添加一个“A”，T载体 是3′带有一个“T”的载体，在连接酶作用下，完成连接，其连接液可以直接用于细菌转化，大 大方便了实验操作。TA克隆的原理请见下图： Q-2：蓝白斑筛选的原理? lac 蓝白斑筛选原理是：载体上携带一段细菌的Z基因，它编码β-半乳糖苷酶的一段146个氨基 lac 酸的α-肽，载体转化的受体菌为Z△M15基因型。这样，载体同宿主通过互补，具有完整的 laclac β-半乳糖苷酶的活性。如果在载体的Z基因中插入外源DNA，造成Z基因缺失，不能合 成α-肽，失去同宿主的互补，不能形成有功能的β-半乳糖苷酶，失去分解X-gal的能力。在 X-gal平板上，含阳性重组体的细菌为白色菌落（质粒载体）或无色噬菌斑（M13噬菌体载体）； 非重组体转化的细菌为蓝色菌落或蓝色噬菌斑。 Q-3：Takara有哪些常用的PCR产物克隆用T载体，各有什么特点? 常用的PCR产物克隆用T载体及各自的特点请见下表： Cod e 产品 特点 应用 No. 由pUC19改建，阳性克隆率极高而背景极 使用时需在待插入的DNA片段的上、下游 327 pBackZero-T lac 低。它消除了pUC19载体上的Z基因 Primer的5′端加上TTTAA 5个碱基。如果需 5 Vector Cloning Kit bla 及多克隆位点，并对β-lactamase () 基 要进行定向克隆，只需在一条引物的5′端加上 因进行了独特的改造，可以定向克隆。 TTTAA 5个碱基。 PCR产物3′端有“A”，TA