土壤纤维素酶活性测定(3,5- 二硝基水杨酸比色法)

一、 原理纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下，它的最 初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。所以，纤维素酶是碳 素循环中的一个重要的酶。纤维素

一、原理 纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下，它的最 初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。所以，纤维素酶是碳素 3,5. 循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的复原糖与二硝基水杨酸反响而生成橙色的 3.5 .氨基-硝基水杨酸。颜色深度与复原糖量相关，因而可用测定复原糖量来表示蔗糖酶的 活性。 二、试剂 1） 甲苯 2）1%lg50%lOOmlo 短甲基纤维素溶液：愈甲基纤维素钠，用的乙醇溶至 3）pH5.5 醋酸盐缓冲液： 0.2mol/L11.55ml95%1L 醋酸溶液冰醋酸溶至 ； 0.2mol/L16.4gCHO2Na27.22gCHO2Na.3H2OIL 醋酸钠溶液或溶至 ； 2323 Ilml0.2mol/L88ml0.2mol/LPH5.5 取醋酸溶液和醋酸钠溶液混匀即成醋酸盐缓冲液。 4）3,5-1.25g50ml2mol/LNaOH125ml 二硝基水杨酸溶液：称二硝基水杨酸，溶于和 水中, 75g250ml7 再加酒石酸钾钠，用水稀释至（保存期不过天）。 5）（lmg/mL） 葡萄糖标准液 80°C1250mg 预先将分析纯葡萄糖置烘箱内约小时。准确称取葡萄糖于烧杯中，用蒸馅水 50mL4°C 溶解后，移至容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中保存期约一星期）。假设该溶液发生 混浊和出现絮状物现象，那么应弃之，重新配制。 、操作步骤 lmg/mL00.10.20.40.60.8mL 葡萄糖标准曲线：分别吸的标准葡糖糖溶液、、、、、于试 ImL,DNS3ml5min, 管中，再补加蒸馄水至加溶液混匀，于沸腾水浴中加热取出立即泠水浴 540nmOD 中冷却至室温，以空白管调零在波长处比色，以值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横 坐标绘制标准曲线。 10g50ml1.5ml15min,5ml1% 称土壤置于三角瓶中，参加甲苯，摇匀后放置再加猿甲 5mlpH5.537°C72h 基纤维素溶液和醋酸盐缓冲液，将三角瓶放在恒温箱中培养。培养结束 lml 后，过滤并取滤液，然后按绘制标准曲线显色法比色测定。（为了消除土壤中原有的蔗 糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照；如果样品 吸光值超过标曲的最大值，那么应该增加分取倍数或减少培养的土样。） U! 四、结果计算 72h,lg 纤维素酶活性以干土生成葡萄糖毫克数表示。 a 纤维素酶活性二样尸 （ aaXn/m 品一无土一无基质） aaa 其中：样品、无土、无机质分别表示其由标准曲线 n 求的葡萄糖毫克数；为分取倍数; m 表示烘干土重