实验报告-细胞骨架的荧光观察

实验三 细胞骨架的荧光染色引言1.1 实验目的1. 了解荧光探针的基本知识2．学习荧光显微镜的工作原理及使用方法3.掌握细胞核和微丝骨架的标记技术1.2 实验原理 细胞骨架：细胞骨架是真核细胞中

细胞生物学实验报告 实验三细胞骨架的荧光染色 1 引言 1.1 实验目的 1. 了解荧光探针的基本知识 2 ．学习荧光显微镜的工作原理及使用方法 3. 掌握细胞核和微丝骨架的标记技术 1.2 实验原理 细胞骨架：细胞骨架是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微 管和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用。 ,, 鬼笔环肽是从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱，它同细胞松弛素的作用相反只与聚合的微丝结合而 ,, 不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合的微丝结合后抑制了微丝的解体因而破坏了微丝的聚合和解聚的 Hoechst33342DNA 动态平衡。是一种亲脂性物质，能与特异性结合的荧光探针，所以被大量用于活细胞的 350nm461nm 观察和定量的研究。荧光激发和发射波长分别为和。 2 实验仪器、试剂及操作步骤 2.1 实验仪器 35mm 荧光显微镜、载玻片、盖片、滴管、滤纸、细胞培养皿（六孔板）、湿盒 2.2 实验试剂 PEM0.5% Triton X-1004%Hoechst.33342:1mg/mL(PBS) 缓冲液、、多聚甲醛、储存液溶于 55nM Alex-phalloidin （鬼笔环肽） 2.3 实验材料 鼠胚成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞 2.4 实验步骤 1.10%DMEM37℃,5%CO2 将原代培养的成纤维细胞放于于小盖玻片上，在含胎牛血清的培养基中于培 70%80% 养箱中培养至细胞融合度达～。 2.37℃ PEM3 取出培养有细胞的小盖玻片，置于小平皿中用预温轻轻漂洗次。 3.37℃4%15min 加入预温多聚甲醛固定。 4.37℃PEM3 用预温漂洗次。 5.0.5 %Triton X-10010min 加入通透处理约。 6.37℃ PEM3 用预温漂洗次。 7.10ul 55nM 取一个洁净的载玻片，按照载玻片的大小在其上放置一条封口膜，在封口膜上上滴加 Alexa-568-phalloidin () 绿，将经上述处理的盖玻片细胞面向下孵育于染色液中，于湿盒中室温避光染色 30min 。 8.37℃PEM3 小心取下盖玻片，将其置于小平皿中（细胞生长的面朝上），用预温避光漂洗次。 9.Ho.3334210ul 在载玻片上分别滴加工作液，将盖玻片上的细胞倒扣在载玻片上室温暗处孵育