pBR322质粒

pBR322质粒【图谱】：pBR322质粒载体的基因组图谱如下：pBR322质粒DNA分子的长度为4363bp，此载体中有两个标记基因，一个是氨苄青霉素抗性基因（Apr），另一个是四环素抗性基因（

pBR322 质粒 pBR322 【图谱】：质粒载体的基因组图谱如下： pBR322DNA4363bp 质粒分子的长度为，此载体中有两个标记基因，一个是氨苄青霉素 AprTetrpBR322DNA24 抗性基因（），另一个是四环素抗性基因（）。现在已知分子共有 71200 种核酸内切限制酶的单一识别位点。其中种限制酶（从：位置按顺时针方向）即 EcoRVNheIBamHISphISalIXmaIIINruI 、、、、、和的识别位点位于四环素抗性基因内部， 2ClaIHindIII9 另外有种限制酶即和的识别位点是存在于这个基因的启动区内，在这个限 DNAtetr3ScaIPvuIPstI 制位点上插入外源都会导致的失活。种限制酶即、和的识别位 DNAampr 点位于氨苄青霉素抗性基因内，在这些位点插入外源则会导致基因的失活。由 pBR3221 质粒载体的结构可知其具有如下优点：（）具有较小的分子量。经验表明，为了 DNA10Kb 避免在的纯化过程中发生链的断裂，克隆载体的分子大小最好不要超过。 pBR322DNA 质粒这种小分子量的特点，不仅易于自身的纯化，而且可容纳较大的外源 DNA2 片段；（）具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号，能指示载体或重组 DNADNA 分子是否进入宿主细胞以及外源分子是否插入载体分子形成了重组子。标记基因 往往可以赋予宿主细胞一种新的表型，这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。当我们把 DNA 一个片段插入到某一个标记基因内时，该基因就失去了相应的功能。当把这种重组 DNA 分子转到宿主细胞后，该基因原来赋予的表型也就消失了。要是仍保留了原来表型的 DNADNA 转化细胞，细胞内含有的分子一定不是重组子。很显然，既要指示外源是否进 DNADNA 入了宿主细胞，又要指示载体分子中是否插入了外源片段，那么这种载体必须 pBR322 至少具有两个标记基因。另外，质粒载体还具较高的拷贝数，而且经过氯霉素扩增 1000~3000DNA 之后，每个细胞中可积累个拷贝，这就为重组体的制备提供了极大的方 便。 pBR322 【相关信息】：质粒载体的构建 pBR322 质粒载体的构建过程可简单地概括如下： 1pBR322pMB1pMB1Rldrd19 、由于质粒的亲本之一是质粒，故首先以为基础，引入质 Tn313.3kbpMB3 粒的易位子，得到的质粒； 2pMB3EcoRI 、的分子量显然使得它不适合作为载体，所以要通过在活性条件下的消化让 DNApMB8 它大部分的无用片段失去，留下来的小片段的的黏性末端连接起来后就形成了 2.6kb 质粒（）； 3pSC101EcoRItetrDNA 、此时，另外一种质粒在活性条件下消化产生了含有抗性的片 pMB8pMB95.3kbpMB9ampstetr 断，这个片断和整合在一起就形成了质粒（）。此时为 表型； 4pMB9amprtetr 、已经初步具备载体的功能，为了让它更加完善，我们要让它具备性能， pMB9pSF2124Tn3Tn3 即在上引入的易位子，但可以来也可以走，为了留住它，我们 Tn3pBR313 切去了中表达转位酶的基因，形成了质粒。 pBR313PstIampstetrpBR318 此后我们兵分两路：一路把的位点除去，使之成为表型的 质粒； 5pBR313EcoRIIamprtetspBR320 、；另一路把的的位点切除，使之成为表形的质粒。 由此我们的到了两种功能互补的质粒，这样我们只要将他们杂交就可以得到一种接近全能的 pBR322 载体质粒了，这就是。 pBR322 的应用 pBR322pBR322 了解了的结构和它的构建过程之后，我们来看在基因工程中的应用。 pBR322 质粒作为一种常用的基因克隆载体，在实际应用中有着非常重要的地位，其中一个 pBR322psbA 突出的例子就是应用作为克隆载体对水稻的叶绿体光诱导基因进行结构分