免疫组化操作规程

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免疫组化操作规程 118cm （一）、仪器设备）不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉； 2 ）水浴锅 （二）、试剂 1PBSpH7.27.4NaCl137mmol/LKCl2.7mmol/LNa2HPO44.3mmol/LKH2PO4 ）缓冲液（～）：，，， 1.4mmol/L 。 20.01mol/LCBpH6.01000ml3g0.4g ）柠檬酸盐缓冲液（，，）：柠檬酸三钠，柠檬酸。 30.5mol/LEDTApH8.0700ml186.1gEDTA·2H2O10mmol/LNaOH ）缓冲液（）：水中溶解，用调至 pH8.0,1000ml 加水至。 41mol/LTBSpH8.0800ml121gTris1NHClpH8.0, ）的缓冲液（）：在水中溶解碱，用的调至加水至 1000ml 。 5a0.1%0.1%CaCl2(pH7.8)b0.4%0.1N ）酶消化液：、胰蛋白酶液：用配制。、胃蛋白酶液：用的 HCl 配制。 63%-H2O230%H2O280% ）甲醇溶液：用和甲醇溶液配制。 7 ）封裱剂： a0.5mmol/LpH9.09.5 、甘油和碳酸盐缓冲液（～）等量混合； bTBS(PBS) 、油和或配制。 8TBS/PBSpH9.09.5pH7.07.4 ）～，适用于荧光显微镜标本；～适合于光学显微镜标本。 （三）、操作流程 1 、脱蜡和水化 6060℃20 脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置分钟或恒温箱中烘烤分钟。 11010 ）组织芯片置于二甲苯中浸泡分钟，更换二甲苯后再浸泡分钟； 25 ）无水乙醇中浸泡分钟； 395%5 ）乙醇中浸泡分钟； 470%5 ）乙醇中浸泡分钟； 2 、抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。 1 ）抗原热修复 1EDTApH8.00.01MpH6.0 （）高压热修复在沸水中加入（）或枸橼酸钠缓冲溶液（）。盖上不锈钢高 5 压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡分钟，然后 10 将盖子锁定，小阀门将会升起来。分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方 法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。 20.01MpH6.095℃ （）煮沸热修复电炉或者水浴锅加热枸橼酸钠缓冲溶液（）至左右，放入组织芯片加 10~15 热分钟。 30.01MpH6.0 （）微波热修复在微波炉里加热枸橼酸钠缓冲溶液（）至沸腾后将组织芯片放入，断电， 5~101-2ARBaxBcl-2C-fosX-junC-kitC-mycE-cadherin 间隔分钟，反复次。适用的抗原有：，，，，，，，， ChromograninACyclinERHeatshockproteinHPVKi-67MDMZp53p34p16p15 ，，，，，，，，，，， P-glycoproteinPKCPRPCNArasRbTopoismeraseⅡ ，，，，，，等。 20.1%0.4%37℃37℃ ）酶消化方法常用胰蛋白酶和胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至，切片也预热至， 5~3037℃30 消化时间约为分钟；胃蛋白酶消化时间为分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有： CollagenComplementCytokeratinC-erB-2GFAPLCALN ，，，，，，等。 3 、免疫组织化学染色 SP 法 1 ）脱蜡、水化； 1