单链可变区片段与趋化因子融合的独特型淋巴瘤疫苗原核表达质粒的

单链可变区片段与趋化因子融合的独特型淋巴瘤疫苗原核表达质粒的　 作者：王福旭　赵冰　程云会　潘崚　罗建民　张学军　董作仁【摘要】 　本研究目的在于克隆小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞膜免疫球蛋白（Ig）的

单链可变区片段与趋化因子融合的独特 型淋巴瘤疫苗原核表达质粒的 作者：王福旭赵冰程云会潘崚罗建民张学军董作 仁 【摘要】本研究目的在于克隆小鼠B细胞淋巴瘤细胞膜免疫球 蛋白（Ig）的单链可变区片段（scFv），与单核细胞趋化因子（MCP-3） 的基因融合，构建融合基因scFv-MCP-3的表达载体，在大肠杆菌中 表达融合蛋白，制备作为治疗B细胞淋巴瘤的独特型融合蛋白疫苗。 采用RT-PCR法扩增BALB/c小鼠源B细胞淋巴瘤A20细胞株的Ig VH和IgVL基因，重组PCR法用一段编码(Gly4Ser)3连接肽的基因 序列连接两基因，制备scFv片段。用相同PCR方法，选用一段编码 NDAQAPKS连接肽的基因序列，连接scFv与MCP-3基因，获得scFv- MCP-3融合基因片段。定向克隆到原核表达质粒pGLo中，并在大肠 杆菌中表达融合蛋白。测序结果表明：分别成功克隆A20细胞的Ig VH和IgVL基因，并成功制备了scFv片段和scFv-MCP-3融合基因 片段；限制性酶切方法证实，重组pGLo/scFv-MCP-3原核表达质粒 中融合基因准确插入。SDS-PAGE电泳分析显示，融合蛋白分子量约 65kD,与预期蛋白分子量一致，并且目的蛋白占菌体蛋白的30%。 结论：本研究成功构建鼠源scFv片段与趋化因子MCP-3融合的独特