病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范

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病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 一、病理科免疫组织化学技术员培训规范： 凡新入我科的病理技术员均需进行免疫组化理论知识的学习、培训，经考核合格、具备病理技术员技士资 质后方能从事免疫组织化学染色。 二、病理科免疫组织化学染色操作规范 1.免疫组织化学染色前的准备事项 (一)组织切片的制备 常规切片脱蜡至水（组织固定需用10%中性甲醛） (二)抗体的选择、稀释和保存 （1）选择抗体应先了解其反应谱和适用条件〔包括适用切片(石蜡切片抑或冷冻切片)、稀释度和温育时 间等〕。 （2）对于未曾使用过的新抗体，应按照有关说明书的提示，以几个不同的稀释度对适宜检材(已知阳性切 片/涂片)进行预试验;根据染色阳性表达的程度和检材背景着色程度，确定用于染色的最适稀释度 （3）抗体的原液应于分装后置于一20℃冷室中保存，切勿反复冻存(以免效价降低)。 （4）抗体的工作液可置于4℃冰箱中保存。 （5）抗体的稀释。 (1)一般用0.01MPBS(生理盐水磷酸盐缓冲液)，pH值7.2。 (2)或用0.05MTBS(生理盐水三经基氨基甲烷缓冲液)，pH值7.6。 (3)必要时可按需要加适量小牛血清清蛋白。 (三)被检测组织内抗原的修复 （1）经4%中性甲醛之类含醛基固定剂固定的组织，其切片中的抗原决定簇因醛的交联作用而被封闭，从 而影响抗原一抗体反应。进行免疫组织化学染色前，对于组织切片进行抗原修复处理，会使组织中的固有 抗原尽量多地暴露出来，提升了大部分检测抗体的阳性率和反应强度。有的抗体不需要进行抗原修复。应 按抗体试剂说明书的提示决定是否进行被检测组织内的抗原修复。 （2）抗原修复缓冲液。 (l)一般为0.01M柠檬酸缓冲液(2.1g柠檬酸溶于100ml蒸馏水中，用2MNaOH调节pH值至6.0)。 (2)有些抗体需要特殊修复缓冲液，如高PH值的EDTA(50mMTris.，10mMEDTA，pH9.0)，或商品化的该高 pH修复液等。 （3）抗原修复的常用方法。