实验方案低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白

低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白实验目的利用低温乙醇法从人血清中分离出免疫球蛋白（Ig），并获得副产物血清白蛋白。实验原理（1）低温乙醇法Cohn6法：美国哈佛大学Ｅ·Ｊ·COHN教授研究组，在短短

低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白 一、 实验目的 Ig 利用低温乙醇法从人血清中分离出免疫球蛋白（），并获得副产物血清白 蛋白。 二、 实验原理 1Cohn6··COHN （）低温乙醇法法：美国哈佛大学ＥＪ教授研究组，在短 短两年建立了低温乙醇分段提取法。 方法原理：往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂，如乙醇、丙酮等，主要是 降低水分子的活度，降低溶液的介电常数，从蛋白分子周围排斥水分子，使蛋白 分子之间通过极性基团的相互作用，在范德华力作用下，发生凝聚。不过由于有 机溶剂存在，降低了蛋白分子表面憎水基团的作用，因而引起蛋白分子聚集的主 20 要极性基团的相互电荷之间的引力。（文献） () 分离过程中，二法通过五个因素的变动五变系统，使很多血浆蛋白质得以 ①“”⑦pH 分离。这五个因素及其各自的作用是；乙醇：使蛋白质分子脱水；值； ② 蛋白质在等电点时易于沉淀；电解质浓度：在低离子浓度下，对蛋白质溶解度 ④⑥ 有较大影响；蛋白质浓度：浓度越低，其沉淀作用越小；温度：在低温下，可 避免乙醇对蛋白质的变性作用。同时，蛋白质溶解为吸热反应，溶解度随温度上 升而增高。 Ⅰ~Ⅵ 经实验得知，利用低温乙醇法能将血清蛋白分成六个组分（），其中免 IgGⅡ+ⅢAlbⅤ 疫球蛋白主要存在于中，白蛋白主要存在于中。 (2)Cohn9Cohn6Ⅱ+Ⅲ 氏法；该法对氏法的组分作进一步分离和提纯，可 Ⅱ—l23(Y—G)Ⅲ1()Ⅲ—2() 获得组分，，，组分一同种凝集素，组分凝血酶原， Ⅲ—3(): 组分血浆酶原等产品。其工艺流程见图