肠道细胞分离

实验方法：1肠道取材：大肠：降结肠和直肠小肠：空肠和回肠取直径为1-3cm的肠道切片4~6个。3个米粒大小的肠切片才能得到1.0X106在人的肠道中1-3cm的肠道切片可能得到的细胞数为0.2TX10

实验方法： 11-3cm4~6 肠道取材：大肠：降结肠和直肠小肠：空肠和回肠取直径为的肠道切片个。 6 31.010 个米粒大小的肠切片才能得到X 6 1-3cm0.2T10 在人的肠道中的肠道切片可能得到的细胞数为X活淋巴细胞 2 试剂： 2.1RPMI-1640(L-glutamine,Hyclone)+15% 完全培养基：含胎牛血清 (fetalbovineserum)+1%/penicillin/streptomycin)4° 青霉素链霉素(。C保存。 2.2-(piperacillin-tazobactam(Zosyn),500ug/ml) 哌拉西林钠三唑巴坦钠注射剂作用：防 ： -20 止肠道真菌的污染。C保存。 2.3BamphotericinB1.25ug/ml 两性霉素()：。作用：阻止酵母菌的生长，但是对人类细胞 -20 的生长同样有抑制作用。C保存。 2.4 胶原酶溶液：选择哪一种？ 0.22ym-2030~50 过滤除菌，C保存。消化液的加入量为样本的倍。 2.4.1II0.5mgII1ml1640+5%+1%/ 胶原酶溶液：胶原酶溶解于的胎牛血清青霉素链霉 2.4.2III0.4mgIII1mlRPMI-1640+10%+1% 素胶原酶溶液：胶原酶溶解于的胎牛血清青 /+0.001%- 霉素链霉素B巯基乙醇 R-mercapthoethanol+0.1mg/mlDNaseI+0.1mg/mltrypsininhibitor+2.5ug/ml ()两性霉素 B 。 1)FBS 两种酶的溶液是两个不同的实验方法。我觉得第二种的效果会好一些。主要的原因是 - °2 不会影响胶原酶的活性，但是会保护细胞)B巯基乙醇的作用一是防止蛋白质或酶等分子 SH-S-S3 DNaseI 中的基氧化成,二是某些酶反应中维持体系的还原环境。)的作用可能是降 DNA4B5 解肠道细菌的。)两性霉素的作用是防止真菌的污染。)胰酶抑制剂的作用可能是 保护某些蛋白质不被消化。 2.5 100%Percoll1:910PBSHBSSPercoll1 悬浮液：按的比例混合X(或)和。即份的 PBS(orHBSS)9Percoll0.22|im4 与份的混合，过滤除菌，C保存。 2.5.2 30%70%Percoll100ml30%Percoll30ml100%Percoll 和的：如配制的，的与相应的 70mlPBS(orHBSS)70%Percoll70ml100%Percoll 的混匀。同样的的就是的与相应的 30mlPBS(orHBSS)470%Percoll0.5% 的混匀。C保存。在的中加入几滴酚红，这样使分 PBSHBSS 离的细胞层界面明显。或是直接买含有酚红的或。 3 器材 3.1 1630ml 或是平端的号针规的的注射器？或是注射器柱塞(指什么？) 30-cm3disposablesyringesattachedtoablunt-ended16-gaugeneedle.OR 原文是：“" strainwithasyringeplunger “” 3.2 70ym100ym 或筛孔的筛网(分离淋巴结时的细胞筛)，高压灭菌。 3.3 37 C的振荡器 3.4 灭菌的镊子， 4Percoll15ml4ml70%Percoll4ml30%Percoll, 实验方案实验前准备梯度：离心管中装和 70%Percoll4°1h 下层为,使用前在C条件下放置至少。