脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义1材料与方法1.1实验动物与分组健康、封闭群sd大鼠42只，体质量（280±30）g，随机分为假手术组及根据后路压迫伤后取材的时间分为0、5、10、2

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义 1材料与方法 1.1实验动物与分组健康、封闭群sd大鼠42只，体质量（280±30）g，随机分 为假手术组及根据后路压迫伤后取材的时间分为0、5、10、20、30和60min 组，每组6只。 1.2试剂及器材l-[2，3，4，5-3h]-arginine、dowexag50w-x8、nadph、钙调 蛋白均购自sigma公司，其余试剂为国产ar级。megafuge1.0r低温离心机为日 本产品，beckmanls5000ce液体闪烁仪为美国产品，cps-1a超声波粉碎机为上 海超声波仪器厂产品。 1.3方法 1.3.1动物模型的制备动物用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射医学专用，取后 正中切口，切除t8～10椎板，暴露脊髓，按nystrom方法[2]后路压迫脊髓 （35.0g/10min）。假手术组仅行脊髓暴露而不致伤。 1.3.2脊髓标本的采集按分组时间要求处死动物后，立即浸入冰水中，取伤段脊髓 或相应部位脊髓置于冰冷的hepes缓冲液中（20mmol/l，ph7.4），匀浆，超声 粉碎。立即置于4℃低温离心机中离心（15000r/min×30min）。 1.3.3[3h]citrulline检测将上述25ml上清液加于含有2mmol/lnadph、 0.5mmol/lcacl2、10g/l钙调蛋白的50mmol/lhepes缓冲液中，ph为7.4。然 后加入25ml[3h]l-arginine（25mci/25ml），置于24℃恒温水浴箱中30min。 立即加入含有2mmol/ledta的20mmol/lhepes反应停止液中，过dowexag层 析柱，于beckman液闪仪中测定[3h]-citrulline的放射活性。 1.3.4蛋白含量的测定采用改良lowry法[3]测定蛋白含量。 1.3.5nos活性表示nos活性表示为每分钟每毫克蛋白形成的[3h]-citrulline的 量。创伤后各时相nos活性以与假手术组相比而得的相对值表示。 1.3.6统计学处理采用f检验和t检验进行统计学处理。 2结果 脊髓压迫伤后即刻，伤段脊髓组织nos活性升高到正常脊髓的1.42倍，有显著差 异（p