细胞增殖毒性实验步骤CCK8

细胞增殖毒性实验步骤CCK8细胞增殖—毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖—毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪

CCK8 细胞增殖毒性实验步骤 细胞增殖—毒性实验步骤 1 、细胞传代、细胞计数、细胞增殖—毒性实验步骤： 75%230 实验准备：用酒精擦生物安全柜台面遍，紫外线消毒分钟（枪、枪头、 15ml50ml 及离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复 DMEM1640)PBS0.25% 温实验所需试剂［细胞培养液（、、磷酸缓冲盐溶液（）、胰酶（ TrypsinEDTA(FBS, —）、胎牛血清）、双抗］所有的试剂、仪器放入生物安全柜前 要用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。 1 ）倒去培养瓶内的培养液； 2 次； 2PBS2ml ）加入洗涤培养瓶内细胞 3) 500ul/05ml2~10min 加入胰酶。（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否 ; 贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落） 410%FBS11.5ml[=23:1 ）加入含的培养液～培养液：胰酶（～）］中和胰酶； 5 ）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜； 6) 1015ml,800rpm3, 将单细胞悬液吸入～离心管中低速离心分钟倒去上清液； ; 710%FBS1~2ml ）加入含细胞培养液吹打悬浮细胞至单细胞悬液 820ul(10ul+10ul: ）吸取细胞悬液细胞悬液台盼兰液给坏死细胞染色，判断细 , 胞活力）至细胞计数板进行细胞计数； CCK-8 实验： 9 ） 96100 在孔板中，给每孔加 L ( 7 0 0 0 μ 约 ),24-72 个的细胞悬液将培养板放在培养箱预培养 375CO2 小时（℃，％），使细胞贴壁； 10) 10L510204080160ug/ml 向培养板中加入μ不同浓度（、、、、、）的待测药物； 24(6122448 小时例如：、、或小时）（药物起 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 11 ） ); 作用 CCK( 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加之前更换新鲜培养基除去 ,) 培养基并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基，去掉药物影响。当然药物 影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收 即可。 1210L10%CCK-8 ）向每孔加入μ（约）溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们 OD; 会影响值的读数） OD; 值） 1314 ）将培养板在培养箱内孵育～小时（半小时测一次 450nm 处的吸光度。 14 ）用酶标仪测定在 0.1MHCL 的溶液或者 15OD,10L ）若暂时不测定值可以向每孔中加入μ 1w/vSDS24, ％溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下小时内测定吸光 度不会发生变化。 1/2