胆固醇氧化酶重组大肠杆菌乳糖诱导发酵双程培养策略恒pH-stat可溶表达硕士论文

For personal use only in study and research; not for commercial use虿重组胆固醇氧化酶表达的发酵优化芈【关键词】 胆固醇氧化酶;

For personal use only in study and research; not for commercial use 重组胆固醇氧化酶表达的发酵优化 虿 ;; ;; pH-stat; 【关键词】胆固醇氧化酶重组大肠杆菌乳糖诱导发酵双程培养策略恒可 芈 ; 溶表达 Cholesterol oxidase; Recombinant Escherichia coli; Lactose induced 【英文关键词】 蚅 Fermentation; Two-phase culture; pH-stat; soluble expression; ,, 【中文摘要】胆固醇氧化酶是一种重要的检测用酶除广泛应用于医疗检测外在食品开发、 蚁 医疗保健、生物农药等方面也有应用潜力。鉴于微生物来源的胆固醇氧化酶表达量小且需要 ,, 胆固醇诱导的问题本实验室成功构建了一株可胞内表达胆固醇氧化酶的基因工程菌但是胆 ,, 固醇氧化酶主要以包涵体的形式存在活性胆固醇氧化酶表达量低。本文采取调整诱导剂优 ,, 化发酵工艺等手段提高活性胆固醇氧化酶产率建立一系列胆固醇氧化酶高效表达技术有助 E. coli 于实现胆固醇氧化酶高效低成本制备。本文以一株胞内表达胆固醇氧化酶的工程菌 BL21(DE3)-PET28a-COD,,, 为生产菌株以减少包涵体形成提高活性胆固醇氧化酶产率为目标 1. 采用外因优化与内因优化相结合的策略对胆固醇氧化酶发酵过程进行优化。采用乳糖诱 ,, 导胆固醇氧化酶表达提高了胆固醇氧化酶可溶表达的比例并优化了乳糖诱导胆固醇氧化酶 ,0.76U/mL,0.45U/mg;IPTG 表达的条件。采用乳糖诱导胆固醇氧化酶表达酶活分别为是诱导 4.02.4, 时的和倍显著提高了活性胆固醇氧化酶的表达水平。在优化后的诱导条件下诱导胆 ,5.8U/mL,7.6 2... 固醇氧化酶表达酶活达到为初始条件的倍。 As an important enzyme, Cholesterol oxidase was widely used in medical 【英文摘要】 蝿 testing, on the other side, Cholesterol oxidase also had prospect in food processing, health care, bio-pesticides, etc. With the problems that low cholesterol oxidase production and needing cholesterol as inducer when cholesterol oxidase product by natural microbial, an engineering strain, expressed cholesterol oxidase intracellular, was successfully constructed in the laboratory. However, cholesterol oxidase mainly expressed in the form... 5-6 摘要 虿 Abstract 6 蒇 7-15 第一章引言 蚄 1.1 7 胆固醇氧化酶及其来源 袈 1.2 7-10 提高重组酶的可溶表达的方法 螆 1.2.1 8 诱导剂的选择 袅 1.2.2 8-9 改变诱导方式 蒃