质粒扩增-小抽-大抽实验方法部分

2.1. pcDNA3-XXX质粒扩增与鉴定2.1.1. 试剂配置LB培养基配方 1000 ml:胰蛋白胨 10 g酵母提取物 5 gNaCl 10 g加去离子水

2.1. pcDNA3-XXX 质粒扩增与鉴定 2.1.1. 试剂配置 LB 1000 ml: 培养基配方 胰蛋白胨 10 g 酵母提取物 5g NaCl 10 g 加去离子水950 ml用5 mol/l的NaOH调pH 到7.0,灭菌 LB固体培养基（Ampicllin抗性）200 ml 胰蛋白胨 2g 酵母提取物 1g NaCl 2g Agarose 3g 加去离子水180 ml用5 mol/L的NaOH调pH 到7.0,灭菌. μ 等温度降至55℃左右时，按终浓度5 g/ml加入氨苄青霉素，混匀，然后 在超净工作台中，倒入到灭菌的平皿中，待凝固后，倒扣于4℃冰箱中备用。 TSS buffer 100 ml PEG 8000 (10%) 10 g DMSO 5ml 1M MgCl 2ml 2 LB培养基加到100 ml μ 然后经过0.2 m微孔滤膜过滤，－20℃储存备用。 α 2.1.2. DH5感受态细胞的制备 μ 1、从含12.5 g/ml四环素LB培养基的平皿中挑取单克隆菌体接种到5 ml 液体培养基中培养过夜。 2、稀释100倍，取0.5 ml菌液50 ml到LB培养基中，37℃振摇 3、2 h后，不断测定培养菌液的OD590值，当光吸收到达0.3－0.5时，取 出菌液。 ℃ 4、菌体用低温离心机2 000 rpm 4，10 min。 5、在菌体中加入原有菌液1/40体积的TSS buffer中重悬细胞沉淀物。在 冰上进行。分装0.5 ml/管放入液氮速冻，随即放入－70℃保存，即为感受态细