生物化学实验基本操作-实验报告

生物化学实验基本操作实验目的熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及计算。实验仪器与试

生物化学实验基本操作 一、 实验目的 1、 熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。 2、 掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。 3、 通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及 计算。 二、 实验仪器与试剂 1 、实验器材 仪器名称 型号 厂家 PH 计 Sartorius PB-10 干燥箱 101EXB-3 型电热鼓风干燥 上海树立仪器仪表有限公司 箱 酶标仪 DNM-9602 酶标分析仪 北京普朗新技术有限公司 2 、实验试剂 试剂名称 生产厂家 生产批号 g 质量（） NaHPO 北京化工厂 20100701 7.16 24 NaHPO 北京益利精细化学品有限公司 20110313 3.12 24 NaCl 天津市塘沽化学试剂厂 850328 0.9 BCA 蛋白定量试剂盒 北京普利莱基因技术有限公 001107 三、 实验内容 （一） 蛋白质的定量测定 1 、实验原理 Bicinchoninic acid (BCA) 法是近来广为应用的蛋白质测定方法。即在碱性环 2+2+1+1+ CuCuCuBCACu 境下，蛋白质与络合并将还原成。与结合形成稳定的紫 562nm 蓝色复合物，在处有高的光吸收值，并与蛋白质浓度成正比，据此可测 定蛋白质浓度。 2 、实验方法 1Working Reagent,WR （）、工作溶液（）的配制： 50BCA Reagent 1Cu Reagent WR 将体积与体积混合即为工作试剂，呈 嫩绿色。 2 （）、标准蛋白溶液配制： 40μl 4000μg/ml 用双蒸水与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释： BSA+60μl HO=100μlBSA=1600μg/ml,50μl 稀释溶液（）（）从中取出连续倍 2 BSA16008004002001005025μg/ml,50μl 比稀释，得到标准溶液、、、、、、各。 3 （）、蛋白测定 10-2000μg/ml96 蛋白质浓度线性检测范围为。微板测定用孔板，反应终体 225μl 积，用酶标仪测定。 a. 25μl200μl WR 微板测定：用加样器将标准品与工作液混合于微板孔中。 b. 3 7℃恒温反应30min。 c. 将反应管温度冷却至室温，测定562nm（实际测定波长为570nm）光密度