转化,摇菌,提质粒

一、感受态细胞XL-1转化实验（1）5ngDNA+100µl感受态细胞XL-1于1.5ml离心管中,混匀，冰浴30min。（2）42oC, 45s。（3）冰浴2min。（4）涂布于固体LB平板上(含5

XL-1 一、感受态细胞转化实验 5ng100µl 1DNA+XL-11.5ml,30min （）感受态细胞于离心管中混匀，冰浴。 o 242C,45s （）。 32min （）冰浴。 o 4LB(50mg/ml,37C) （）涂布于固体平板上含氨苄青霉素预热。 o 537C16-18h （）放入恒温孵育箱，待液体吸收完全后，倒置孵育。 o 64C （）保鲜袋密封后，倒置放于冰箱保存。 二、菌液的培养与质粒的提取 1.5 每个样本挑取个细菌，进行摇菌，提取质粒。（一个细菌一支管） 50ml5mlLB5µl50mg/ml 在离心管里加入液体和氨苄青霉素，用 o 200µlLB37C 枪头挑取过夜培养平板上的单克隆，枪头打入离心管中，置于 250r/min1618h 摇床，培养～，质粒提取。（ 老师，这里要先挑取一个细菌 5 ） 进行摇菌后再分成五支离心管重新摇菌，还是直接挑取个菌落直接摇菌 () 质粒提取采用天根质粒小量多次提取试剂盒提取，步骤如下： 1500µlBL13000rpm1min （）吸附柱中加入平衡液，离心。倒掉收集管中废液， 吸附柱放回收集管，备用。 （2） 5ml13000rpm/min,10min 收集菌液，离心，收集沉淀。 （3） 500µlP1(RNaseA), 加入溶液含使用涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 （4） 500µlP2,68 加入溶液温和地上下翻转～次，使菌体充分裂解。 （5） 700µlP3,68 加入溶液立即温和地上下翻转～次，充分混匀，此时会出 现白色沉淀。 （6） 13000rpm/min10min(800µl/) 离心，收集上清分次加入过滤柱中次。 （7） 13000rpm2min(800µl) 离心后将上一步得到的滤液分次加入吸附柱中。 （8） 13000rpm1min 离心，弃掉滤液。 （9） 500µlPD,13000rpm/min1min 加入去蛋白液离心后弃滤液。 10600µlPW,5min,13000rpm/min1min （）加入漂洗液静置离心后弃滤液。 1110 （）重复步骤。 1213000rpm/min2min （）离心，彻底去除柱子中残留废液。 13DNA100µl5min （）将吸附柱放入新的离心管，悬空滴加无菌双蒸水，静置。 13000rpm/min1minDNA 离心，所得到的液体即为高纯度的溶液，置于