碱性蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

碱性蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及发酵条件优化摘要 通过测量比较牛奶平板上透明圈的大小，从土壤中筛选出一株高产碱性蛋白酶的菌株BP-10，通过产碱性菌株生理生化试验，16S rDNA序列鉴定为专性嗜碱性芽

碱性蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及发酵条件优化 摘要通过测量比较牛奶平板上透明圈的大小，从土壤中筛选出一株高产碱性 蛋白酶的菌株BP-10，通过产碱性菌株生理生化试验，16SrDNA序列鉴定为专性嗜 碱性芽孢杆菌Bacilluspseudofirmus。然后从酶活为26.34U/ml的10号菌株 （BP-10）出发，确定了其最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨，在培养36h后 达到最大酶活为193.39U/ml，比优化前提高了7.34倍。 关键词碱性蛋白酶筛选鉴定培养发酵优化 碱性蛋白酶(AlkalineProtease)是一类适宜于在碱性条件下水解蛋白质肽键 的酶类，广泛存在于动、植物及微生物生物体中,在猪的胰脏中最早被发现 【1】【2】。1945年瑞士DrJaag等人在地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中发现了碱性蛋白酶【3】。碱性蛋白酶作为工业催化剂已广泛应 用于制革、银回收、医药、食品加工、饲料、化学工业、废物处理等行业,尤其是 作为无磷洗衣粉的添加剂应用广泛【4】，目前碱性蛋白酶的销售量大约占全世界 每年总销售量的30%左右【5】。但洗涤剂用碱性蛋白酶要求其在广泛的pH和温度 范围内保持较高的酶活力和稳定性,同时还必须与含有多种氧化剂、鳌合剂和表面 活性剂的洗衣粉相融合。目前,在工业应用中的很多碱性蛋白酶存在弊端,例如在表 面活性剂、氧化剂、热稳定性、酸碱稳定性方面及培养基成本较高等【6】【7】。 因此,筛选新的高产碱性蛋白酶菌株和对其产碱性蛋白酶的酶学条件研究具有重要 的理论意义和应用价值，同时利用基因工程手段进行改造将是以后研究的重点方 向。本实验从土壤中筛选出若干产碱性蛋白酶的菌株并摸索了其酶学性质及产酶的 最始条件，为后期改造菌种提供了基础。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1土样来源