石蜡切片与冰冻切片对比全集

石蜡切片与冰冻切片《一》石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机

石蜡切片与冰冻切片 《一》石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为 (section) ～，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过。切好的蜡带，放人℃左 57um10um40 右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免 疫组织化学染色时会出现假阳性现象。为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切 片漂浮在％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人～℃的水浴中进行第二次 304550 展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张 力差展开切片的皱褶。为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白 HE 甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、 氨丙基乙氧基甲硅烷等处理。 3—— 《二》冰冻切片 冰冻切片是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优 (fiozensection) 点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采 用冰冻切片。新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片 机是保证切片质量的关键。恒冷箱切片机是目前最常用的冰冻切片机，可得到的连续 (cryostat)3—5um 薄片。组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。一般认为， 冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。含水量较多的组织中较易 出现冰晶。 ．防止组织中冰晶形成的方法 1 速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。方法包括： (1) 干冰丙酮乙醇法：将～丙酮无水乙醇装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈 1)—()150200ml() 黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达℃，用一小烧杯内装异戊烷约，将此烧杯缓慢置人干冰 -7050ml 丙酮或无水乙醇饱和液内，至异戊烷温度℃时即可使用。将组织大小为．， —()-70(lcm×08cm×05cm) 投入异戊烷内速冻～秒后取出，置恒冷箱内以备切片，或置℃低温冰箱内贮存。 3060-80 液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒直径约，可适量加包埋剂浸没组织， 2)(2cm)OCT 然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持原位， 切勿浸入液氮中，大约～秒后组织即迅速冰结成块。取出冷冻的组织块立即置人恒冷箱切片机冷冻 1020 切片或置人℃冰箱贮存备用。 -80 应用蔗糖溶液：将组织置于％～％蔗糖溶液～天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水 (2)2030l3 量，可防止或减少冰晶的形成。 ．恒冷箱切片法 2 冷冻后的组织块即可用于恒冷箱切片，其过程包括以下步骤： 组织包埋根据研究目的取所需组织如切取小鼠肝脏．．．大小的组织块，用 (1)(10cm×l0cm×05cm) 滤纸吸去多余水分，将组织块平放于用特制锡纸小盒直径约或软塑瓶盖内。加适量包埋剂浸没 (2cm)OCT 组织，℃浸透分钟。为防止冰晶形成，包埋前可进行蔗糖处理。 4020—30 组织冷冻：按上述干冰丙酮乙醇法或液氮法冷冻组织。 (2)—() 切片：切片前小时将恒冷箱切片机的温度设定为℃左右，以备切片。切片时温度以℃ (3)1-18-15—-18 为宜，温度过低组织易破碎。刀的角度要适当否则不易连片。用载玻片贴附组织切片时，勿上下移动。未 ? 经固定的新鲜组织在冰冻切片后应使用相应的固定剂固定分钟。冰冻切片后如不立即染色，必须用电 10 风扇吹干，贮存于℃低温冰箱内或进行短暂预固定后低温冰箱保存。染色前从冰箱内取出切片，置室温 -70 干燥分钟，再经冷丙酮固定～分钟未固定者，漂洗次后即可进入染色程序染色可用 10510()PBS3(HE 甲醛、冰醋酸和％乙醇快速固定分钟。 951—2)