实验八血糖的测定

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实验 血糖的测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (POD) 作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合 物，其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在500nm波长处测定吸光度，与标 准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾 5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后 用蒸馏水稀释至1L。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠 100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至 100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。 3. 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先 配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。 4. 酶酚混合试剂 取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。 5. 12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸 馏水至1L。 6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于 12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至 100ml。 7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中，加 12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。 【操作】 取3 支试管,编号，按下表操作。 表血糖测定操作步骤 加入物 (ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0. 2 葡萄糖标准液 － 0. 2 －