基因工程基础知识

第一章 基因工程第一节 基因工程概述一．基因工程的概念操作环境操作对象操作水平基本过程结果生物体外基因分子水平剪切→拼接→导入→表达人类需要的基因产物由于基因工程是在DNA分子水平上进行操作,因此

第一章基因工程 第一节基因工程概述 一．基因工程的概念 操作对象 操作水平 基本过程 结果 操作环境 基因 分子水平 →→→ 剪切拼接导入表达 人类需要的基因产物 生物体外 由于基因工程是在水平上进行操作,因此又叫做。 DNA分子重组DNA技术 二．基因工程的基本工具 “”—— （一）分子手术刀（简称） 限制性核酸内切酶限制酶 1 ．来源：主要是从中分离纯化出来的。 原核生物 2DNA ．功能：能够识别双链分子的某种的核苷酸序列，并且使每一条链中部位的两 特定特定 个核苷酸之间的断开。 磷酸二酯键 3DNA ．结果：经限制酶切割产生的片段末端通常有两种形式：和。 黏性末端平末端 “”—— DNA （二）分子针线 连接酶 1E·coliDNATDNA ．分类：根据酶的来源不同，可分为连接酶和连接酶两类 4 2 ．功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的。 磷酸二酯键 DNA(E·coliDNATDNA) ★两种连接酶连接酶和连接酶的比较： 4 ① 相同点：都缝合磷酸二酯键 ②EcoIiDNA 区别：．连接酶来源于大肠杆菌，只能使之间连接； 黏性末端 TDNA 连接酶能缝合，但连接平末端之间的效率较。 两种末端低 4 DNADNA ★连接酶与聚合酶作用的比较 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 DNA 连接的 链 双 链 单 不同点 模板 模板 不要 模板 要 连接的对象 2DNA 个片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链 DNA 片段上 作用实质 形成 磷酸二酯键 相同点 化学本质 蛋白质 ()“”—— 三分子运输车 载体 1.载体具备的条件： ① 能在受体细胞中并； 复制稳定保存 ②DNA 具有一至多个，供外源片段插入； 限制酶切割位点 ③DNA 具有，供重组的鉴定和选择。 标记基因 2.基因工程常用的载体有：、和等。 质粒噬菌体动、植物病毒 DNA 最早应用的载体是，它是细菌细胞中的一种很小的双链分子。 质粒环状 三．基因工程的基本过程