玉米转基因完整流程

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农杆菌菌株的培养及感受态细胞的制备 LBA44043mlYEB100mg/ml28℃ 挑取根癌农杆菌单菌落于的液体培养基（链霉素）， 振荡培养过夜 500μl50mlYEB100mg/ml28℃ 取过夜培养菌液接种于（链霉素）液体培养基中，振荡培 OD6000.5 养至为左右。 5000rpm5min 离心，集菌。 10ml0.15MNaCl5000rpm5min 加悬浮细胞，离心， 10ml20mMCaCl224200μl 加预冷的悬浮细胞，冰浴，小时内使用，或分装成每管， 1min-70 液氮中速冻，置于℃保存备用。 植物表达载体向农杆菌感受态细胞的转化 200ml1μgDNA30min 取感受态细胞，加入构建好的质粒加入到，混匀后，冰浴。 2-3min375min3min 液氮中速冻，℃水浴，接着冰浴。 1mlYEB284h 加入培养基，摄氏度慢速震荡培养。 5000rpm5min 离心，弃上清，集菌。 0.1mlYEB100mg/mlKan125mg/mlSm 加入培养基重新悬浮细胞，涂布于含有和的 YEB28 平板上，℃培养 阳性克隆的鉴定 100mg/mlKan125mg/mlSmYEB 挑取平板上长出的单菌落，接种于含有和的液体培 28℃DNADNAPCR 养基中，振荡培养过夜，小量提取质粒，以质粒为模板进行扩增鉴定。