滤纸条降解试验 产酶条件优化方案

滤纸条降解试验吸取纤维素降解菌种子液1ml接种到装有50ml赫奇逊培养液的250ml三角瓶中，瓶中放置1cm×6cm的新华Ⅰ号滤纸条，同时设置不加菌液的滤纸条作为对照，每个处理3个重复。 置于30℃恒

滤纸条降解试验 吸取纤维素降解菌种子液1ml接种到装有50ml赫奇逊培养液的250ml 三角瓶中，瓶中放置1cm×6cm的新华Ⅰ号滤纸条，同时设置不加菌液的滤纸 条作为对照，每个处理3个重复。置于30℃恒温摇床，200r/min振荡培养 5d，观察各瓶中滤纸条溃烂情况。 赫奇逊培养液：KHPO1.0gMgSO·7HO0.3gCaCl0.1gNaCl 24422 0.1g FeCl0.01gNaNO2.5gpH7.2～7.3蒸馏水1000ml 33 纤维素酶活的测定 1 CMC酶活测定 取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶 液。分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入0.8% 的羧甲基纤维素钠溶液1.5mL，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保 温50min，保温完成后取出试管，加入2mLDNS显色剂，震荡摇匀，将各试 管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取 出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲 线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计 算出平均值后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。 2 FPA酶活测定 取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶 液。分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入滤纸 (1cm×6cm)一条，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保温50min， 保温完成后取出试管，加入2mLDNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水 浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取出试管用流 水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲线1号管作 为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计算出平均值 后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。 3 Avicelcellulase(Avicelase) 500uLofenzymemixedwith1mLofAvicel(1%,w/v)for determiningtheAvicelaseactivity.详细见给你的那篇文献 通过以上两种方法，测得复筛得到的酶活高的菌株每8h的粗酶酶活产酶 曲线，测到72h。确定酶活达到最大的最适时间。 产酶条件优化