表达rhTNFR-Fc的重组CHO细胞悬浮驯化及培养工艺研究的中期报告

表达rhTNFR-Fc的重组CHO细胞悬浮驯化及培养工艺研究的中期报告尊敬的评委老师，大家好！我是研究生XXX，本次中期报告的研究主题是关于表达rhTNFR-Fc的重组CHO细胞悬浮驯化及培养工艺研究

rhTNFR-FcCHO 表达的重组细胞悬浮驯化及培养 工艺研究的中期报告 尊敬的评委老师，大家好！ XXXrhTNFR-Fc 我是研究生，本次中期报告的研究主题是关于表达 CHO 的重组细胞悬浮驯化及培养工艺研究。 rhTNFR-FcrhTNFR-Fc 首先，我们简单介绍一下重组的背景。是一 TNFR 种融合蛋白，将人类肿瘤坏死因子受体（）的外膜区域与人免疫球 G1IgG1Fc 蛋白（）的段连接在一起，具有较高的亲和力和半衰期，是 CHO 治疗类风湿性关节炎、肿瘤等疾病的有效药物。而细胞则被广泛应 用于生物制药领域，具有良好的生产能力和相对稳定的遗传学特性，因 rhTNFR-Fc 此成为制备的理想宿主细胞株。 HEK 293T 基于以上理论基础，本研究以细胞中已成功构建的 pCEP4-TNFR-FcPCRrhTNFR-Fc 质粒为模板，通过扩增得到所需的基因 CHOpCDH-CMV-MCS-EF1α-Puro 片段，并将其克隆到细胞表达载体 CHO-rhTNFR-Fc 上，构建了细胞株。此外，为了达到高效的表达水平， rhTNFR-FcIgG1FcC 我们还将基因的信号肽去除，同时在的段的端加 His 入一段标签序列，以方便后续的纯化和鉴定。 CHO-rhTNFR-Fc 在细胞培养过程中，我们发现细胞株相对于未转染 CHO 的细胞存在一定程度的生长变慢和可溶性的降低，这可能与重组蛋 白的表达负担和细胞内环境的变化有关。因此，为了克服这些问题，我 们进行了一系列悬浮细胞驯化和培养工艺的研究。 初步结果表明，通过逐渐提高转染细胞株的培养浓度、优化培养基 的组成和添加成分、采用适宜的通气方式和混合方式等手段，可以显著 提高细胞的生长速度和表达产量，降低细胞死亡率和蛋白质的聚集现 象，从而为后续的纯化和功能研究提供了可靠的基础。 CHO-rhTNFR-Fc 最后，我们将进一步深化对于细胞系的驯化和培养