实验三 叶绿体色素的提取分离

实验三 叶绿体色素的提取分离、理化性质及定量测定【实验目的】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、 胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离色素是对其认识和

实验三叶绿体色素的提取分离、理化性质及定量测定 【实验目的】 ab 叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素、叶绿素、胡萝 卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离色素是对其认识和了解的前提。色素的含量在一定 程度上可反映植物的光合能力大小。 本实验目的学习和掌握植物中叶绿体色索的提取、分离方法；通过定性检测，掌握色素理化 性质，进一步理解光合作用过程；学习叶绿体色素定量测定的原理和方法。 【实验原理】 1 、色素的提取： ab） 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素和叶绿素和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大 类。它们与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可 用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 2 、色素分离： 色素可用色谱分析的原理加以分离，方法有多种，如纸层析、柱层析等。纸层析是其中最简 便的一种。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两 相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间层析后，可将各 种色素分开。 流动相：是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。 固定相：是指被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维素上的羟基具亲水性使这部分水束缚 在纤维素周围，不易扩散而成为固定相。 分配系数：当一种溶质分布在两个互不相溶的溶剂中时，它在固定相和流动相两相内的浓度 KD） （ 之比是个常数，称为分配系数。分时系数小的溶质在流动相中的分配的数量多，移动快； 分配系数大的溶质在固定相分配的数量多，移动慢。 3 、理化性质： 叶绿素是一种由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇 和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。 /COOCH/COOK 、 C\HONMg^+2KOH—YHQHYjoHwOH CHwONM< 2w4 w4 'COOCKCOOK 、 n 叶绿素电化叶妹素甲伸叶嫌斛 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查或用分光光 度计精确测定；叶绿素吸收光剧子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到 基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。 叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏 更快，而类胡萝卜素则较稳定。 H* 叶绿素中的镁可以被所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素， 铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。