透射电镜样品制备技术改良研究

透射电镜样品制备技术改良研究摘要透射电镜样品制备技术改良研究结果表明，通过延长钺酸固定时间利 包埋剂梯度渗透时间，避免了细胞器的降解，有利于细胞组织保存和超微结构的 观察，并口.减少了包埋块切割过程中

透射电镜样品制备技术改良研究 摘要透射电镜样品制备技术改良研究结果表明，通过延长钺酸固定时间利包埋 剂梯度渗透时间，避免了细胞器的降解，有利于细胞组织保存和超微结构的观察， 并口.减少了包埋块切割过程中的破损现象和刻痕，提高了切割质量，此方法能提高 生物样品制备质量。 关键词透射电子显微镜；样品制备；超微结构：超薄切片；技术改良 近年来，电子显微镜广泛应用于材料科学、生命科学和临床病理诊断等领域,是 科学研究的一个重要手段。但由于生物材料电镜样品制备过程繁琐和样品质量不高， 影响了样品结构的观察研究，耗费了研究者许多时间和精力，制约了科研的发展 ［1-2］ 。针对不同细胞的生物学特征，需调整不同的样品制作过程，如选择合适的 ［3］ 固定液和操作时间。笔者通过长期摸索，总结出一套简便高效的样品制作方法， 提高了电镜超薄切片的观察和分辨率，为获得高质量透射电子显微镜切片提供一条 新途径。植物细胞生物学特征比其他细胞复杂，本文以红枫为例，介绍改良后的电 镜样品制备技术。 1 材料与方法 1.1 供试材料与设备 （ AcerpalmatumAtropurpureum 植物样品:红枫）,安庆师范学院植物园提供;设 LeicaEMUC6FIJEM140（） 备：超薄切片机、本电子透射电子显微镜。 1.2 试验方法 〜 12mm3,2.5% 一是取材。采摘红枫叶片后，立即切成投入戊二醛固定液中。 取样时所用器具必须干净，刀、剪等必须锋利，在操作时尽量避免拉、锯、压等动 〜 2.5%4℃23h, 作对组织细胞造成的机械损伤。二是前固定。戊二醛固定液先于放置 7d）o4°C,0.1moL/LPBSBuffer 后在冰箱过夜（戊二醛中最多放置三是冲洗。于用 〜 （pH7.2）31015min（0.1moL/LPBS50mL0.2 值冲洗次，每次配制方法:的 moL/LPBSBuffcr+50ddH20）oF,1%4h, 四是后固定。室温用饿酸浸没样品，不超过 2h4℃, 一般。以样品变黑为准，如有些植物的根不变黑，以变黄为准。五是冲洗。用 〜〜 0.1moL/LPBSBuffer（pH7.2）351015min 值冲洗次，每次。六是脱水。室温 70% 、 （ 30%50%80%95%30min, 下，逐级酒精脱水、、、、纯丙酮），每级丙酮要 370% 换次，在酒精中可过夜（逐级酒精最好现配现用）。七是渗透。室温下，无 Epon812 水丙酮与树脂以不同比例混合，将样品加入其中缓慢渗透。无水丙酮：包 ； DMP-30）=31,2hDMP-30） 埋剂（不加催化剂：无水丙酮：包埋剂（不加催化剂 ；； =11,3hDMP-30）=13,3h ：无水丙酮：包埋剂（不加催化剂：包埋剂（不加 ； DMP-30）,1hDMP-30）,3h 催化剂纯包埋剂（加催化剂。以上步骤均振荡处理。 八是包埋。将材料定准方向。往包埋板内倒入少许包埋剂，将样品用牙签挑起一小 190% 块倒包埋板内，每个孔的两端各放个小块。然后再将包埋剂倒入包埋孔至满，