蛋白表达重组质粒构建是否遇到过如下问题

本实验源于一次失败的实验，从平板挑单菌落提取载体pET-32a（+），从EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切位点插入PCR产物-PrP435。但由于单菌落所得载体pET-32a（+）在EcoRⅠ位点突变，由G