实验一CTAB法提取植物基因组DNA

实验一 CTAB法提取植物基因组DNA实验目的：学习从植物组织中（幼叶）提取基因组DNA的基本原理和方法。实验原理：采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类（尤其是氧化酶

CTABDNA 实验一法提取植物基因组 实验目的： DNA 学习从植物组织中（幼叶）提取基因组的基本原理和方法。 实验原理： 采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶 DNA 类（尤其是氧化酶类），其对的抽提产生不利的影响，所以在抽提缓冲液 中需加入抗氧化剂或强还原剂（如巯基乙醇）以降低这些酶类的活性。在液氮中 研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,) 十六烷基三甲基溴化铵，是一 种阳离子去污剂，可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。 >0.7mol/L NaCl 该复合物在高盐的溶液中（）是可溶的，通过有机溶剂抽提， CTAB 去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀（能溶于乙醇）即可使核酸 分离出来。 CTAB15 溶液在低于度时会形成沉淀洗出，因此再将其加入冰冷的植物材料 6515 中之前必须预热（度），且离心温度不要低于度。 实验步骤： 13-5g1.5ml 、取幼嫩的植物叶片（）剪碎液氮研磨成粉，转入离心管内。加 65℃DNA651-2h(1.5h) 入等体积的预热的提取缓冲液置于℃的恒温水浴摇床上。 2(241)55 、加入等体积的氯仿：异戊醇：，轻轻上下颠倒分钟，静置分钟， 12000rpm10 之后于离心分钟。 32 、吸取上层水相，重复步骤一次。 42/32-20 、吸取上层水相，加入预冷体积的异丙醇，轻缓颠倒分钟并置℃冰 10minDNA12000rpmDNA70% 箱内，待沉淀后于离心收集，收集的于乙醇中洗 2-3DNA 次。将弃去乙醇风干后的加适量水使其溶解。 5DNA1-2μlRNAaseA10mg/ml371h 、待完全溶解后加入不含（），℃保温以 DNARNA 除去中的。 6Eppendorf1mL24110 、于管中加入氯仿：异戊醇（：）轻轻上下颠倒分钟后 10000rpm10 离心分钟。 71/103M2 、吸取上层水相并先后加入体积的醋酸钠及倍总体积的预冷的无 -201010000rpm10 水乙醇，接着置于℃冰箱，分钟后离心分钟，弃去无水乙醇， 702-3DNA200-500μl TE 加入％乙醇洗涤次，风干，最后将溶于适量（）中。