生物化学实验--聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质 【目的】 1 ． 掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。 2 ．熟悉 聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。 【原理】 带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电

. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质 【目的】 1． 掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。 2．熟悉 聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。 【原理】 带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰 胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时， 蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交 联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂 过硫酸铵（ Ap ）和加速剂 四 甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1章）。 聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度 或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般 选用 7％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分 离物质（见第 2篇第 1章）， 使样品分离效果好， 分辨率较高。一般醋酸纤 维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5～ 7条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能 分离出十几条到几十条来（图 3-4 ），是 目前较好的支持介质， 应用十分广 泛。 图3-4 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱 1/ 9