门冬酰胺酶的制备与分析报告

重组天冬酰胺酶的制备、纯化与鉴定赵雅嫱 黄妤璠 龙益如 王敏敏 白华山1 原理本实验主要是利用基因工程手段构建L-天冬酰胺酶基因工程菌。L-天冬酰胺酶的生理作用主要体现于其抗癌抗肿瘤活性，特别

专业资料 重组天冬酰胺酶的制备、纯化与鉴定 赵雅嫱黄妤璠龙益如王敏敏白华山 1原理 L-L- 本实验主要是利用基因工程手段构建天冬酰胺酶基因工程菌。天冬酰 胺酶的生理作用主要体现于其抗癌抗肿瘤活性，特别是对非霍奇金淋巴瘤和 ALL 的有很强的抑制作用，目前适用于治疗黑色素瘤、非何杰金病淋巴瘤等， 也可以用于治疗急性单核细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病等。 L- 目前，我国虽已投入生产天冬酰胺酶，但是较国外生产成本高、菌种产 L- 酶活性低，提取纯化工艺落后。针对这些问题，本实验对大肠杆菌重组天冬 L- 酰胺酶的制备、纯化与鉴定进行了系统性的探究，意图改进重组天冬酰胺酶 的表达，优化其纯化工艺，分析其鉴定方法与性质。 本实验主要进行了重组克隆载体和表达载体构建、表达与鉴定的摸索；酶蛋 白的诱导表达条件分析；酶蛋白分离纯化手段的比较和选择，如蔗糖溶液提取、 CM-SephadexDEAE-Sepharose 硫酸铵分级沉淀、和离子交换层析以及亲和层析； 重组蛋白酶活力监控与本底蛋白活力测定等等。 2实验材料 实验仪器见表1.1。型号和生产厂家根据实验室现有条件核定。 表1.1实验仪器或装置 仪器名称 型号 生产厂家 超净工作台 PCR扩增仪 word 完美格式