分子生物学技术考试答题要点

深圳大学研究生试题 答案学 院 生命科学学院 专 业 细胞生物学 课程名称 分子、生物学研究方法 拟题人 田生礼 唐玉林 审题人 1

深圳大学研究生试题答案 学院生命科学学院专业细胞生物学 分子、生物学研究方法田生礼唐玉林 课程名称拟题人 审题人 1.9 何谓载体？载体的必备条件有哪些？（分） DNADNA 携带外源基因进入宿主细胞的工具。体外重组实验中，将外源片段运送进宿主 (vector)DNA 细胞进行扩增或表达的运载工具称为载体，这也是一个分子。 12 ）克隆载体上要有复制起点，表达载体还需有启动子；）载体上要有选择标记基因或报道 3 基因；）除了置换型的载体外，载体上具有多个限制性内切核酸酶的酶切位点，对一种限 制酶来说只能有一个。 2.DNA 采用末端标记探针是常用的分子生物学技术，请你先解释分子生物学中核酸探针的 DNA10 概念，请你采用至少两种方法来标记探针。（分） 答题要点： 核酸探针：是指利用杂交技术检测特异核酸序列必须使用探针。一个探针可以是能检测互补 DNARNA 核酸序列的简单的或分子。 DNA 末端标记探针可以有如下方法 32 1）. T7DNA3’→5’α-p-dGTP 利用聚合酶在没有底物时，发挥它的外切酶活性，随后加入， 3’ 发挥它的聚合酶活性标记端； 32 2）. CIP-p-dATP 利用牛小肠碱性磷酸酶（）处理，再用磷酸激酶在底物存在的情况下标记 DNA5’ 端； 32 3）. DNAα-p-dGTPDNA3’ 利用末端转移酶在底物存在的情况下标记的端。 3.cDNA3’5’ 一个未知序列的真核片段，和端均为平末端，欲把其克隆到一个原核表达载 体中，并且可以获得表达。采用哪些克隆策略可以成功克隆该基因（至少两种方法）？如何 12 证明克隆和表达成功？（ （提示：先克隆测序、再克隆、鉴定、表达、证明表达成功） 分） 答题要点： 1SmalI 由于是一个未知序列的基因可以采用先克隆到测序载体的方法：在载体上涌切割 234 载体直接插入；采用同聚物加尾克隆；加人工接头；加衔接物。克隆后测序。再根据 PCR 成熟肽的序列设计引物，利用扩增目的基因，通过酶切后克隆到表达载体；通过酶切 SDS-PAGEwesternblot 鉴定和测序确定克隆成功，通过诱导表达后的电泳及或质谱鉴定和 证明表达成功。