农杆菌介导棉花遗传转化及转phya植株的获得-作物遗传育种专业毕业论文

农杆菌介导棉花遗传转化及转 phyA 植株的获得39优秀毕业论文精品参考文献资料河北农业大学硕士学位(毕业)论文附表磷标准曲线配制磷酸二氢钾梯度浓度溶液(250、500、750、1000、1

优秀毕业论文 本 研 究 以 优 良 的 陆 地 棉 品 种 冀 无 2 0 3 1 、 中 5 2 1 和 农 大 9 4 ． 7 为 受 体 材 摘 要 料 ， 利 用 农 杆 菌 介 导 的 方 法 ， 将 含 有 根 特 异 性 表 达 启 动 子 的 p h y A 基 因 转 入 供 试 品 种 的 下 胚 轴 中 ， 利 用 正 交 设 计 方 法 优 化 了 农 杆 菌 侵 染 棉 花 下 胚 轴 的 转 化 条 件 ， 并 获 得 抗 性 愈 伤 组 织 ： 将 ， 西 州 基 因 导 入 珂 3 1 2 和 珂 2 0 1 的 胚 性 愈 伤 组 织 中 ， 芬 得 了 经 P C R 检 测 的 转 基 因 植 株 ； 以 珂 3 1 2 、 中 5 2 1 和 农 大 9 4 ． 7 的 茎 尖 分 生 组 织 为 受 体 ， 获 得 ． 析 ， 了 含 p h y A 基 因 的 T 2 代 植 株 ， 进 一 步 对 转 基 因 植 株 的 后 代 进 行 根 系 植 酸 酶 活 性 分 为 棉 花 现 代 分 子 育 种 增 添 新 的 内 容 和 新 的 种 质 材 料 ， 同 时 为 农 作 物 有 效 利 用 土 壤 1 ． 通 过 正 交 设 计 有 机 磷 资 源 开 辟 一 条 经 济 有 效 的 途 径 。 主 要 研 究 结 果 如 下 ： 方 法 ， 研 究 了 农 杆 菌 介 导 的 棉 花 下 胚 轴 遗 传 转 化 过 程 中 菌 液 浓 度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表 养 温 明 ， 四 个 因 素 均 对 抗 性 愈 伤 的 诱 导 率 有 极 显 著 影 响 ， 其 诱 导 效 应 依 次 是 共 培 度 ， 菌 液 O D 值 > 侵 染 时 问 ) 共 培 养 时 问 。 按 照 正 义 设 计 的 原 则 ， 最 终 得 至 0 农 杆 菌 介 导 转 化 棉 花 下 胚 轴 的 最 佳 条 件 是 ： 菌 液 O D 值 为 0 ． 3 ， 侵 染 1 5 m i n ， h 。 研 究 了 卡 那 霉 素 ( K m ) 对 棉 花 愈 伤 组 织 诱 导 和 生 长 的 影 响 ， 2 4 o C 共 培 养 2 4 结 果 表 明 ， 不 同 的 品 种 对 K m 的 敏 感 性 不 同 ， 中 5 2 1 愈 伤 组 织 的 筛 选 压 为 m g ／ L ， 冀 无 2 0 3 1 和 农 大 9 4 ． 7 愈 伤 组 织 的 筛 选 压 为 1 0 0 1 5 0 m ∥ L 。 2 ． 利 用 优 化 的 条 件 ， 以 珂 3 1 2 、 中 5 2 1 和 农 大 9 4 ． 7 的 茎 尖 分 生 组 织 为 受 体 ， 获 得 了含phyA基因后代植株，Southern杂交证实外源基因已整合到棉花基因组中。 通 过 对 具 有 S o u t h e r n 斑 点 杂 交 信 号 的 6 棵 T l 代 和 9 棵 T 2 代 单 株 进 行 植 酸 酶 根 系 活 性 分 析 表 明 T l 代 和 T 2 代 单 株 根 系 分 泌 活 性 都 明 显 高 于 未 转 化 的 对 照 单 株，是对照的1．32-7．76倍。 3 ． 利 用 优 化 的 条 件 ， 将 p h y A 基 因 导 入 珂 3 1 2 和 珂 2 0 1 的 胚 性 愈 伤 组 织 中 ， 获 得 了 经 P C R 检 测 的 转 基 因 桓 株 。 关 键 词 ： 棉 花 ； 农 杆 菌 介 导 转 化 ； 植 酸 酶 基 因 ； 植 酸 酶 活 性 精品参考文献资料