实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应

实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。了解细菌在不同培养基的不同生长现象

实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应 一、实验目的。 1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理。 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存 在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴 别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 1. 糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的 pH5.2—pH6.8 代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，黄色 紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2. M.R 甲基红试验（试验） pH4.4pH6.2 甲基红试验，红色～黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、 乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等， pH4.2 使培养基的降低到以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸 pH6 转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使升至大约。 3. Voges-Proskauer-V.P. 试验（伏普试验，试验） - 伏普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细 菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下， V.P. 被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为反应阳性。 4. 靛基质试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基 质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。 5. 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色 的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 6. 明胶液化实验 2525 明胶在度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在度以上时明胶就会液化。 4 有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在度 仍能保持液化状态。 7. 柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分 解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0()7.6() ～， 黄蓝 由绿色变为深蓝色。 8. 淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。 三、实验仪器、材料和用具 324 实验仪器：度恒温培养箱、度冰箱；