试验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量

实验六 柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量一、目的要求1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基

实验六柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量 一、目的要求 1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。 2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基本原理和操作方法。 二、基本原理 用连续回流提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝做净化剂进行液-固萃取净 化处理，使提取液中具有紫外吸收的黄酮类及其他极性大的干扰组分保留于柱上，小檗碱、 药根碱等小檗碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。盐酸小檗碱在345nm±1nm处有最大吸收， 在此波长处测定洗脱液的吸收度，以吸收系数法按盐酸小檗碱计算总生物碱含量。 三、仪器与试药 1.分析天平、恒温水浴锅、分光光度计。 2.量瓶、三角瓶、烧杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色谱柱。 3.色谱用中性氧化铝，其他试剂均为AR级。 4.万氏牛黄清心丸(市售品)。 四、操作步骤 1.提取 去剪碎的万氏牛黄清心丸约4g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇 (1﹕100)适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50mL量瓶中，用盐酸-甲醇 (1﹕100)稀释至刻度，摇匀。 2.净化 精密量取上述提取液5mL，置氧化铝柱(内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法 装柱，用30mL乙醇预洗)上，用25mL乙醇洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，用乙醇稀释 至刻度，摇匀。 3.测定法 精密量取上述净化液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至 刻度，摇匀。以2mL乙醇及0.05mol/LHSO液稀释至50mL的混合液为空白，用1cm比色池， 24 在345nm波长处测定吸收度。按盐酸小檗碱(CHNO·HCL)的吸收系数()为728计算 20174 即得。本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于1.7%。 五、思考题 1.本实验操作中应注意哪些问题？ 2.欲证明此方法的可靠性，须做什么试验？如何设计？