(完整版)WesternBlot(免疫印迹法)实验方法步骤

Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤发布日期:2008-8-25  热门指数:4360 Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤：n     样品制备n     电

Western Blot() 免疫印迹法实验方法步骤 :2008-8-25 :4360 发布日期热门指数 Western Blot() 免疫印迹法 4 主要包括以下个基本步骤： n 样品制备 n 电泳分离 n 蛋白的膜转移 n―― 免疫杂交与显色蛋白检测 溶液和试剂 n1X (PBS) 磷酸盐缓冲液 nModified RIPA buffer Tris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ;NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA: 1mM ;P MSF: 1mM ;Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1microgram/ml each ;Na3VO4: 1mM ;NaF: 1mM n1X SDS 样品缓冲液 62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 25°C), 2% w/v SDS, 10%,50 mM DTT, 0.01% w/v 于甘油溴酚蓝 n 转移缓冲液 25 mM Tris base, 0.2 M, 20% (pH 8.3) 甘氨酸甲醇 n10X Tris (TBS) 缓冲盐 1L 10X TBS: 24.2 gTris base, 80 gNaCl;1N HClpH 7.6 准备用调为 nBSA 脱脂奶粉或 n 甲醇 nTBS/T 缓冲液 1X TBS, 0.1% Tween-20 nTBS/T 封闭缓冲液（）