生物制药论文-组织型纤溶酶原激活剂

1引言(或绪论) 组织型纤溶酶原激活剂(Tissue Type Plasminogen Activator, t-PA)激活纤溶 酶原形成纤溶酶,是体内纤溶系统的生理性激动剂,在人体纤溶和凝血的平衡调

1引言(或绪论) 组织型纤溶酶原激活剂(Tissue Type Plasminogen Activator, t-PA)激活纤 溶 酶原形成纤溶酶,是体内纤溶系统的生理性激动剂,在人体纤溶和凝血的平衡 调节中发挥着关键性的作用,是一种新型的血栓溶解剂。t-PA在组织和体液中含量 甚微,分子量很大,从天然组织提取或人工合成药用t-PA均有很大难度。本实验运 用基因工程手法,从人胎盘染色体基因库中筛选出TPA基因,将其雨质粒结合,导入 到人黑色素瘤细胞当中,组建能够表达t-PA基因的工程细胞。然后将人黑色素瘤细 胞无血清连续培养,并运用高效诱导剂,从而快速、大量地获得了含组织型纤溶酶原 激活剂(tPA)水平较高的培液。经免疫亲和层析、Sephadex G-150凝胶过滤,培液 中t-PA得以快速有效地纯化。将纯化后的tPA与WHO标tPA抗体作免疫鉴定。 2组织型纤溶酶原激活剂简述 2.1组织型纤溶酶原激活剂 原激活剂(PA)是以丝氨酸为活性中心的蛋白酶。它能将纤溶酶原转化为纤溶 酶,在纤溶系统中有重要作用。同时,PA与细胞转移、血液凝固、组织重建、激欣 产生及原发性肿瘤的发生等生理和病理生理现象有密切的关系。 人纤溶酶原激活荆有尿激酶型(uPA)及组织型(tPA)两种主要类型。这两种蛋 白质免疫性不同,分子量有区别,由不同的基因编码。 tPA主要是由血管内皮细胞合成的单链多肽,分子量约为68000,在纤溶酶或胰 蛋白酶作用下,水解Arg275-Ilu276肽键,形成由二硫键连接的双链结构。氨基末端 在重链,羧基末端在轻链。重链有两个三角区结构,并有与纤维结合素指形结构有同 源性的区域和生长因子样区域等。轻链含有由His(322)}、Asp(371)、Ser (478) 组成的酶活性中心。