us sp.R04羟基联苯1,2-双加氧酶多样性及其功能研究

Rhodococcus sp.R04羟基联苯1，2-双加氧酶多样性及其功能研究【摘要】：联苯的氯代衍生物多氯联苯(PCBs)是广泛应用的重要工业原料。它是一种严重的环境污染物,对人类有致癌作用。多氯联

Rhodococcus sp.R0412- 羟基联苯，双加氧酶多样性及其功能研究 (PCBs) 【摘要】：联苯的氯代衍生物多氯联苯是广泛应用的重要工业 , 原料。它是一种严重的环境污染物对人类有致癌作用。多氯联苯的 微生物好氧降解是通过联苯代谢途径进行的。联苯的上游代谢途径需 ,2,3-(BphC) 要四个酶的参与其中二羟基联苯双加氧酶属于外部双加 ,, 氧酶的一种它在联苯和多氯联苯的降解中是一个非常关键的酶其结 , 构功能和底物特异性等方面已成为该领域研究的热点。 Rhodococcussp.R04,8bphC, 基因组测序发现该基因组中含有个基因 bphClbphC8 分别命名为至。基于氨基酸序列的相似性和外部双加氧 ,BphCl,BphC2,BphC3,BphC8 酶的分类属于类型 I,BphC4,BphC5,BphC6,BphC78BphC 属于类型Ⅱ。个之间的氨基酸 11%77%, 序列相似性为～。根据全基因组序列设计引物从 Rhodococcussp.R048bphC, 基因组中扩增出个基因将它们分别克隆 pBV220-His,, 到表达载体中并获得了表达。用离子交换一步层析获得 BphC8,SDS-PAGE 了电泳纯的和分子排阻层析表明它是一个亚基分 35KDpH20 子量为左右的同源六聚体。最适温度和最适分别为℃和 9.0bphC2pBV220 。我们将克隆到温度诱导的表达载体和化学诱导 pET21a,pBV220-bphC2 的表达载体中构建了重组质粒和 pET21a-bphC2BphC2BphC2 。通过表达获得了可溶性的酶和具有酶 ,, 活性的包涵体上清经离子交换和硫酸铵沉淀获得了电泳纯包涵体将 ,BphC2 五步法洗涤获得了电泳纯。在此基础上对纯化后的可溶性和