高效液相色谱法

高效液相色谱法1 简述 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进人检测器，由积

高效液相色谱法 1 简述 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱 柱，对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入柱内，各 组分在柱内被分离，并依次进人检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色 谱信号。 1.1 对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪，由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和 “” 色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局液相色谱仪检定规程定 3.3 期检定并符合有关规定。色谱柱内径一般为9～4.6μm，填充剂粒径为～ 10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样 量、低死体积、高灵敏度的高效液相色谱仪。 1.1.1 色谱柱 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的 载体有硅胶、聚合物符合硅胶和聚合物等；常见的填充剂有十八烷基硅烷键合硅 胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常 见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合 硅胶也可用作反相色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱 柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键 合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色 谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变 60℃ 化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过。 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，